目的：　　 1了解斜纹夜蛾触角感器的分布及形态结构。　　 2制备斜纹夜蛾SlitOR2多克隆抗体和多肽抗体。　　 3鉴定斜纹夜蛾SlitOR2基因的时空表达情况，包括不同组织和不同发育时期的表达状况。　　 方法：　　 1通过扫描电镜技术，分析斜纹夜蛾嗅觉器官即触角上的嗅觉感受器的种类和分布。　　 2斜纹夜蛾SlitOR2多克隆抗体的制备和多肽抗体的制备　　 (1)斜纹夜蛾SlitOR2基因第三胞内区原核表达载体的构建通过分析SlitOR2基因的序列特征，克隆该基因的最大非跨膜区段（第三胞内区），构建原核表达载体pET28a-iSlitOR2Ⅲ。　　 (2)重组载体pET28a-iSlitOR2Ⅲ在大肠杆菌中的诱导表达及优化将正确构建的重组载体pET28a-iSlitOR2Ⅲ转化到Transetta表达菌，经IPTG诱导表达，SDS-PAGE和Western-blot分析。比较不同IPTG浓度下重组蛋白表达情况，以选择最佳的诱导条件。　　 (3)抗原抗体的制备提取纯化上述表达的SlitOR2第三胞内区蛋白片段为抗原免疫兔子，制备多克隆抗体。　　 (4)多肽抗体的制备分析SlitOR2的氨基酸序列，经序列比对和多肽特性分析，选取特异性和亲水性较好的肽段作为抗原制备多肽抗体。　　 3斜纹夜蛾SlitOR2的时空表达情况　　 (1)斜纹夜蛾SlitOR2mRNA的时空表达情况用半定量RT-PCR技术对SlitOR2mRNA的组织特异性（触角、头、胸、腹、足、翅）和不同发育阶段（幼虫期、卵期、蛹期和成虫期）表达情况进行分析。　　 (2)斜纹夜蛾SlitOR2时空表达的蛋白鉴定直接从组织中提取斜纹夜蛾成虫不同组织（触角、头、胸、腹、足、翅）和不同发育期(卵期、幼虫期、蛹期和成虫期）的膜蛋白，分别以抗原抗体和多肽抗体为一抗，采用Western-blot技术分别鉴定SlitOR2基因在不同组织中和不同发育时期的蛋白表达情况。　　 结果：　　 1触角感受器种类及分布斜纹夜蛾触角呈细长的丝状，感受器主要分布在触角的背面、腹面和外侧面。主要类型有毛形、刺形、腔锥形和栓锥形等。雄蛾感器比雌蛾稍粗长，其它无明显差异。　　 2斜纹夜蛾SlitOR2多克隆抗体的制备和多肽抗体的制备　　 (1)成功扩增了SlitOR2最大非跨膜区段348bp，克隆至载体pET-28a，构建了重组表达载体pET28a-iSlitOR2Ⅲ。该重组子在IPTG浓度为0.1mmol/L、诱导温度为25℃、过夜诱导时诱导效率最高，重组蛋白大部分以包涵体形式表达。经纯化活化重组蛋白后，免疫兔子获得的抗原抗体，效价为1：800K。　　 (2)选取SlitOR2蛋白中特异性和亲水性高的区段“AENGGMTGLLRK”，合成的多肽抗体效价为1:50K。　　 3斜纹夜蛾SlitOR2的时空表达情况　　 (1)斜纹夜蛾SlitOR2mRNA的时空表达半定量RT-PCR结果表明斜纹夜蛾嗅觉受体基因Ⅱ主要在成虫期的触角中表达，其他部位和发育期未检测到表达。　　 (2)斜纹夜蛾SlitOR2时空表达的蛋白鉴定提取组织膜蛋白，以抗原抗体为一抗，Western-blot结果表明表明抗原抗体特异性不高，非特异性条带较多，目的条带难以区分；以多肽抗体为一抗，Western-blot鉴定结果表明目的条带单一清晰，多肽抗体特异性较高。SlitOR2主要在成虫触角中表达，这与之前半定量RT-PCR结果基本一致。但在足、头和中期蛹中也看到有微量蛋白表达。可能是与目的蛋白大小类似的其它非特异性蛋白条带，也可能是该蛋白在足部、头部和中期蛹中有微量表达，因为足部的跗节和头部的口喙也分布有少量的嗅感器，而中期蛹中表达也符合昆虫嗅觉发育规律。　　 结论：　　 1扫描电镜观察斜纹夜蛾触角感器的超微结构，清楚分辨出感器的分布及类型。感器的类型和其他鳞翅目蛾类类似，要类型有毛形、刺形、腔锥形和栓锥形等。　　 2制备的抗原抗体特异性不高，可能是由于选取的抗原部分编码116个氨基酸，只占蛋白全长的1/4，表明取蛋白全长的一小部分作为抗原制备抗体，会降低抗体特异性，不十分可行。制备的多肽抗体特异性较高，可以用于后续相关实验。　　 3半定量RT-PCR分析表明SlitOR2在成虫期触角大量表达，其他部位表达未检测到；Western-blot鉴定结果表明SlitOR2主要在成虫触角表达，在中期蛹、头部口喙和足也有微量表达。SlitOR2在口喙和足中的表达还有待于用real-timePCR或insituhybridization等实验进一步确认。