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目的:通过动物实验,系统观察糖神胶囊在糖尿病大鼠肾损害中的保护作用,初步探索黄芪在糖神胶囊中的最佳剂量。并通过实验,对糖神胶囊肾保护作用的机理做深入探讨,为糖神胶囊在临床推广提供实验和理论依据。以求找到一条防治糖尿病肾病的有效途径。
方法:1.制备糖神胶囊,并根据所含黄芪剂量的不同依次分为:糖神1号,糖神2号,糖神3号。2.制备动物模型选用健康雄性Wistar大鼠,体重180-210g。饲养5日后,禁食12小时,用链脉佐菌素(Streptozpcin,STZ.美国Sigma公司产品)溶于新配制的0.1mmol/L构椽酸钠缓冲液,制成10mg/ml的STZ溶液,按60mg/kg腹腔注射,72小时后测尾尖血糖,血糖>13.5mmol/L者确认为DM大鼠模型。正常对照,腹腔内注射等溶积的枸橼酸钠缓冲液。3.实验分组将成模鼠随机分成4组:三个治疗组即:黄芪低剂量(LDT)组、黄芪中剂量(MDT)组、黄芪高剂量(HDT)组,一个糖尿病对照(DM)组;设正常对照(NC)组,每组13只。4.灌药喂养大鼠每公斤体重用药剂量按成人6.25倍折算,LDT组:灌服糖神1号;MDT组:灌服糖神2号。HDT组:灌服灌喂糖神3号。DM组与NC组:灌服等容量的蒸馏水。各组动物均用普通饲料喂养,自由进食水,明暗周期12h/12h,每日灌药1次,连续8周。5.检测指标及方法动物灌喂8周后称体重并检测如下指标。(1)24h尿蛋白收集大鼠24小时尿液,待测尿微量白蛋白(mAlb)和尿肌酐(Ucr)。(2)心脏取血测空腹血糖(FBG),血脂(TG、CHO),果糖胺(FIM),血肌酐(Scr)。(3)处死大鼠取双肾,测右肾湿重(电子天平称量)。(4)病理学检查:所取左肾脏去包膜,将上级放入10%的福尔马林中固定、脱水、石蜡包埋,3um切片,HE及PAS染色,用图像分析仪对肾小球进行病理分析,通过对肾小球毛细血管的横切面积的立体定量分析来反映肾小球的变化。(5)用免疫组织化学法检测ICAM-1的肾脏表达,将大鼠肾脏做石蜡切片,用链酶亲和素-生物素-过氧化酶复合物法(SABC)进行免疫组织化学染色。(6)所有实验数据以-X±S表示,组间差异用方差分析,P<0.05有统计学意义,采用SPSS11.5软件分析。
结果:1.LDT、MDT、HDT三组FBG、FIM、mAlb、肾脏形态学及粘附因子ICAM-1的改善均有统计学意义(P<0.05),但与NC组比较亦有统计学差异(P<0.05)。2.LDT、MDT、HDT三组之间比较:FBG、FIM改善无差别(P>0.05);mAlb、肾脏形态学及粘附因子ICAM-1的改善,LDT组和MDT组之间无统计学差异(P<0.05),HDT与LDT、MDT均有统计学差异。3.各组之间TG比较无统计学意义(P>0.05),HDT组CHO与DM组比较有统计学差异(P<0.05),与NC组比较亦有统计学差异(P<0.05)。4.HDT组Scr、Ccr与DM组比较有显著差异(P<0.05),与NC组相比则无差异(P>0.05)。MDT和HDT组与NC组有统计学差异(P<0.05),与DM组无差异(P>0.05)。
结论:1.三组糖神胶囊对糖尿病大鼠肾损坏均有保护作用,以高剂量黄芪组效果最佳。2.三组糖神胶囊均能改善糖尿病大鼠的糖代谢,但降糖作用不明显。3高剂量黄芪的糖神胶囊能改善糖尿病大鼠的脂代谢,降低胆固醇。4.三组糖神胶囊均能改善糖尿病大鼠尿微量白蛋白,高剂量黄芪的糖神胶囊效果较好。5.高剂量黄芪的糖神胶囊可明显改善糖尿病大鼠的肌酐和肌酐清除率。6.ICAM-1在糖尿病大鼠肾脏的阳性率增加,可能参与了糖尿病大鼠肾损害的进程。7.三组糖神胶囊均能够降低ICAM-1在糖尿病大鼠肾脏的表达,其中高剂量黄芪组较低、中剂量黄芪组效果明显。