论文部分内容阅读
研究背景肝癌(Liver cancer)是威胁人类生存的恶性肿瘤之一,原发性肝癌中大部分是肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC),是全球男性中第五大最常见恶性肿瘤和女性中第八大最常见恶性肿瘤,也是全球第二大癌症死亡原因。感染慢性乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是目前世界范围内的主要危险因素之一。据统计,在2012年全球新发77万例肝癌,其中56%与HBV有关,目前全球HCC发病率有增加趋势。根据2015年统计,大约全球人口的3.50%,即2.57亿人感染了 HBV,其中以亚洲和撒哈拉以南非洲的流行率特别高,每年报告的慢性乙型病毒性肝炎(CHB)新增病例为470万例。许多慢性乙型肝炎患者有发展为肝硬化和肝癌的风险,肝癌仍然是亚洲地区的一种高度相关的疾病。目前肝癌患者的有效治疗仅在肿瘤负担较低的疾病早期阶段较理想。在这一阶段,手术切除、肝移植和局部消融疗法都可能达到治愈效果,治疗后的患者估计存活时间可超过5年。因此,HCC的早发现,早诊断,早治疗对于预后仍至关重要。乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是已知最常见的HCC病因。HCC在发生早期常无明显症状,常于晚期才被发现,导致预后较差。HCC是一种侵袭性的癌症,早期发现治疗对HCC预后有很大影响。HCC病例大多数都伴有乙型肝炎病毒(HBV)感染,同时其他非HBV因素可能会增加CHB患者患肝癌的风险。HBV在HCC的发生中既有直接作用,也有间接作用。HBV的直接致癌作用包括整合到宿主基因组中,导致DNA基因缺失、顺式/反式激活、易位、融合转录本的产生和普遍的基因组不稳定性,以及病毒转录本(HBsAg和HBx)的多效性等。在HBV感染过程中宿主免疫反应引起的反复肝脏炎症可导致肝纤维化和肝硬化,加快肝细胞周转率,从而促进变异积累,最终导致癌变。由于HBV并不是直接的细胞病变,通常认为宿主对病毒感染的肝细胞的反应介导了肝细胞的损伤,并且由于长期的慢性肝脏炎症和弱效的免疫介导的病毒清除,导致肝硬化和肝癌的发生发展。同时慢性乙型肝炎是一种动态发展的疾病,慢性乙型肝炎患者往往在不同的临床阶段表现出不同的血清ALT活性、HBVDNA表达量和HBV抗原水平。通常认为癌症由多种因素综合作用引起,包括遗传基因突变和表观遗传改变等因素。这可引起相应的mRNA在结构或数量上的异常表达,从而影响正常的生物应答,最终引起癌变。在HBV诱导的肝癌中,HBx被认为是最重要的因素。转录抑制因子锌指和同源框2(zinc-fingers andhomeoboxes 2,ZHX2)是一种转录抑制因子,最早由Olsson等人发现于1977年,并主要定位于细胞核中发挥转录抑制作用。ZHX2最初作为AFP表达的负调控基因被发现,随后发现其抑癌基因作用。在肝癌组织和HepG2细胞系中存在ZHX2基因启动子高甲基化,且导致ZHX2 mRNA表达水平下调。ZHX2基因从多方面参与了肝癌抑制作用。研究目的鉴于以上的基本背景和理论,本研究旨在通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)评估外周血单个核细胞(PBMC)ZHX2 mRNA表达水平与乙型肝炎病毒相关肝细胞癌(Hepatitis B virus-associated hepatocellular carcinoma)的关系,并分析 ZHX2 mRNA 表达与乙型肝炎病毒相关肝细胞癌患者病情及严重程度的相关性。研究方法本研究共纳入HCC患者共76例,CHB患者共52例,26例健康志愿者作为健康对照组(HCs)。采集研究对象的空腹外周血,并提取外周血单个核细胞(PBMC)RNA,对RNA进行逆转录,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测所有入组对象PBMC中ZHX2基因的mRNA表达水平。结果1.实验对象的基本临床特征:本研究共选取154例受试者入组进行研究,其中76名HCC患者(HCC组),52名CHB患者(CHB组),26名健康志愿者(HCs组)。经统计数据分析结果发现,三组研究对象在性别(P=0.762)和年龄(P=0.605)上无明显统计学差异;在 ALT(P=0.004)、AST(P<0.001)、GGT(P<0.001)、AKP(P<0.001)、TBIL(P<0.001)、ALB(P<0.001)等方面存在明显统计学差异;HCC 组和 CHB 组患者在 HBeAg(P=0.021)、AFP(P<0.001)、INR(P=0.032)、PT(P=0.011)、PTA(P=0.004)方面存在明显统计学差异,而在 HBsAg(P=0.418)、HBVDNA(P=0.386)方面无明显统计学差异。2.对三组病例ZHX2 mRNA表达水平进行比较。我们发现HCC组、CHB组、和HCs组三组之间ZHX2基因mRNA的表达水平之间存在明显差异(P<0.001)。其中,HCC组ZHX2 mRNA表达水平明显低于CHB组(Z=-4.466,P<0.001)和HCs组(Z=5.218,P<0.001),CHB组ZHX2 mRNA表达水平明显低于与HCs组(Z=-2.507,P=0.012)。3.HCC患者的ZHX2 mRNA表达水平与HCC患者的HBsAg无明显相关(Spearman’s r=-0.003,P=0.980);HBeAg(+)组与 HBeAg(-)组的 ZHX2 mRNA表达水平无明显统计学差异(Z=-0.341,P=0.733),HBVDNA(+)组与HBVDNA(-)组的ZHX2 mRNA表达水平无明显统计学差异(Z=-0.688,P=0.491);ZHX2 mRNA 表达水平与 HCC 患者的 ALT(Spearman’s r=0.031,P=0.791)、AST(Spearman’s r=-0.002,P=0.985)、GGT(Spearman’s r=-0.008,P=0.946)、AKP(Spearman’s r=0.013,P=0.910)、TBIL(Spearman’s r=0.163,P=0.159)、ALB(Spearman’s r=-0.064,P=0.583)、AFP(Spearman’s r=-0.085,P=0.466)、INR(Spearman’s r=0.157,P=0.174)、PT(Spearman’s r=-0.199,P=0.085)、PTA(Spearman’sr=-0.172,P=0.137)之间无明显相关。4.HCC患者肝硬化(+)组与肝硬化(-)组的ZHX2mRNA表达水平无明显统计学差异(Z=-0.458,P=0.647);CTP分级A级、B级与C级三组之间的ZHX2 mRNA表达水平(P=0.495)无明显统计学差异;TNM分期(Ⅰ+Ⅱ)组与TNM分期(Ⅲ+Ⅳ)组的ZHX2mRNA表达水平无统计学差异(Z=-0.726,P=0.468);肿瘤大小(<5cm)组与肿瘤大小(≥5cm)组的ZHX2 mRNA表达水平无明显差异(Z=-0.780,P=0.436);ZHX2 mRNA表达水平在肿瘤数量(1个)组明显高于肿瘤数量(多个)组(Z=-2.517,P=0.012);ZHX2 mRNA表达水平在血管侵袭(-)组明显高于血管侵袭(+)组(Z=-2.281,P=0.023)。结论1.HCC的ZHX2基因mRNA表达水平明显低于CHB和HCs,这提示ZHX2 mRNA的表达可能与HCC的发生有关。2.ZHX2 mRNA表达水平在肿瘤数量(1个)组明显高于肿瘤数量(多个)组,在血管侵袭(-)组明显高于血管侵袭(+)组,这提示ZHX2mRNA表达可能与HCC的严重程度有关。