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由实验室筛选保藏的产碱杆菌Alcaligenessp.DN25具有较高的降氰活性,有一定的工业应用价值。处理成本是工艺能否工业化的考量指标之一,而培养基的成本在细胞培养环节中占据重要作用。本论文从成本控制的角度出发,对产碱杆菌DN25发酵培养基进行优化,并构建实时定量PCR方法研究氨基酸对降氰酶基因表达水平的影响,从而为未来产碱杆菌DN25的工业应用提供一些基础数据。建立实时定量PCR方法检测产碱杆菌DN25降氰基因的表达水平,能免除国标法测定氰化物所造成的轻度污染。分别制备目的基因cdE和内参基因16SrRNA标准品,梯度稀释后制作标准曲线,得到R2分别为0.9985和0.9991,扩增效率分别为1.04和0.97。选取价格低廉、来源广泛的农林废料取代葡萄糖、酵母粉和蛋白胨作为培养基的碳氮源,并考察其最适加入量;研究金属离子对产碱杆菌DN25生长和活力的影响。优化后培养基成分(g/l):玉米浆10g,NH4Cl5g,NaCl0.5g,K2HP04 2 g,pH=8.0。相比于基本培养基,优化后生物量和菌体活力分别提高了 29.0%和29.3%,成本降低了 66.5%,同时培养时间缩短,到达稳定期的时间减少了 4 h,生长速率提高了 2.1倍。考察甲硫氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、组氨酸、赖氨酸和谷氨酸对产碱杆菌DN25生长和活力的影响情况,发现不同氨基酸的影响作用不同。只有苯丙氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸、组氨酸和半胱氨酸能够促进菌体的生长,生物量分别提高了 5.5、4.6、3.2、2.0和1.3倍。菌体活力结果表明,组氨酸和丙氨酸与对照组的相差不大,而半胱氨酸、甲硫氨酸和苯丙氨酸的菌体活力有所降低,分别减少了 63%、61%和82%。实时定量PCR方法检测得到的降氰酶基因表达量与其活力大致吻合,证明该法检测产碱杆菌DN25降氰基因表达水平的适用性,可为未来控制培养成本的研究提供一些实验手段。本文利用新型玉米浆培养基作为产碱杆菌DN25的营养源,提高了生物量和活力,并且降低了成本。实时定量PCR方法表明,氨基酸对产碱杆菌DN25的生长有促进作用,但无法刺激降氰酶的分泌与表达。