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现代猪生产中饲料成本约占总成本的70%,提高猪饲料转化效率,节约饲料成本,是提高生猪养殖效益的重要手段。骨骼肌是猪机体最大的组织,所消耗的能量约占总代谢的60%,降低猪骨骼肌能量代谢是提高饲料效率的重要途径。MiRNAs(miRNAs)是一类保守的、长度大约为20-24个核苷酸的微小RNA,它主要通过降解靶标基因的m RNA或者抑制其m RNA的翻译水平进而负调控基因的表达。乳酸脱氢酶(LDH)、低密度脂蛋白(LDL)、甘油三脂(TG)、肌酐(CRE)、葡萄糖(GLU)等因子广泛参与糖代谢、脂肪代谢,与能量代谢密切相关。我们前期的结果显示在饲料效率高的猪骨骼肌中miR-208b表达量上调,而线粒体基因大部分下调,同时也发现猪骨骼肌中LDH酶的活性在饲料转化效率有差异的个体间存在显著差异。本研究应用GWAS技术,结合细胞和个体水平基因功能分析,初步研究了miR-208b和LDH、LDL、TG、CRE、GLU这6个能量代谢因子影响猪饲料效率的作用机制,为猪饲料效率性状改良提供了重要理论依据。本研究取得以下结果:(1)在成年大白猪中通过Northern blot杂交,对心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、淋巴、腓肠肌、背最长肌、趾长伸肌、比目鱼肌、脂肪等组织做了miR-208b的组织表达谱,结果显示miR-208b在成年大白猪的心、腓肠肌、背最长肌、趾长伸肌、比目鱼肌等肌肉组织中都有表达,而且在心脏组织中表达量最高,但是在其它组织中几乎没有表达。。(2)用Target Scan软件对miR-208b的靶基因进行了预测,在BHK-21细胞中,通过双荧光素酶报告基因试验,验证了MED13是miR-208b的靶基因,该基因与甲状腺激素通路相关,暗示着miR-208b与甲状腺激素信号通路有关。(3)将20只Babl/c小鼠随机分为4组,5只/组:第一、二试验组分别给予150、600ug T3/kg BW腹腔注射,T3溶解于0.17 m M Na OH中;第三组(NC)给予0.17 m M Na OH腹腔注射做阴性对照;第四组(Mock)不加处理做空白对照。试验时间持续2个星期。结果显示:NC组与Mock组的FCR没有显著差异;150ug T3/kg BW组的饲料利用效率比NC组的有显著下降,下降了约21.3%;600ug T3/kg BW组的饲料利用效率比NC组的有极显著下降,下降了约38.1%.说明了一定浓度的甲状腺激素可以降低饲料转化效率。(4)将40只SD大鼠随机分为5组,8只/组:第一、二、三、四组分别给予300,30,3,0.3mg MMI/L的饮水处理;第五组给予正常饮水(0mg/L)作为对照,试验时间为28天。结果显示:在MMI浓度为0.3mg/L时,比对照组的饲料转化效率显著提高了约9.4%.说明了一定浓度的MMI抑制甲状腺激素后,可以提高饲料转化效率。(5)对0.3mg MMI/L饮水处理组和对照组SD大鼠的腿肌,提取RNA后反转录,通过荧光定量PCR检测miR-208b,β-MHC,α-MHC,UCP-2,PGC1-α几个基因表达量的变化。结果发现:0.3mg MMI/L饮水处理组中miR-208b,β-MHC基因表达量显著上调;PGC1-α,UCP-2,α-MHC的表达量比对照组的显著下调。说明了甲状腺激素信号通路参与了快慢肌的形成,并初步推测了甲状腺激素信号通路调节能量代谢的下游基因可能有UCP2、PGC1-α.(6)测定了187头大白猪群体的5个与能量代谢相关的血清生化指标(LDL、GLU、TG、CRE、LDH),并与RFI和FCR性状指标进行相关分析,结果显示:与RFI显著相关的血液生化指标有GLU、LDL、TG;与FCR显著相关的血液生化指标有GLU。(7)对LDL、GLU、TG、LDH血清生化指标在187头大白猪群体中用GAPIT进行了GWAS分析,分别选择了与相关指标最显著的3-5个SNPs位点和距离最近的基因,找到了4个(LRRN3、GATA3、ADRA1D、CNTNAP5)可能与血清生化指标相关的候选基因。(8)在读研究生期间其它工作中,对7种不同引物设计方法的RT-q PCR,从检测成功率、线性动态范围和灵敏性3个角度进行了比较,发现方法:F.Stem-loop S-poly(A)-tail RT-PCR和方法B.Liner S-poly(A)-tail RT-PCR两种RT-q PCR方法整体来看比较好,但各有优点:在miRNA含量较少的情况下,可以选择方法B,其灵敏度较高;在由于miRNAs结构原因比较难设计引物时,可以选择F,其适应范围广,成功率高。本研究初步揭示了miR-208b与饲料转化效率的相互关系,为今后的研究提供了一定的理论基础;找到了可能与RFI和FCR相关的LRRN3、GATA3、ADRA1D、CNTNAP5等候选基因,为今后的分子育种标记的筛选提供了一定的参考价值。