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目的砷中毒是一种因食用受污染的食物和水而导致的严重疾病。心血管毒性是砷中毒的重要危险因素之一。研究表明,砷中毒可导致大鼠心脏血管周围胶原沉积,发生心室重构以及纤维化。原花青素具有抗炎,抗氧化和心血管保护作用,也可以改善肝、肾纤维化。课题组前期研究发现,砷中毒的大鼠心脏中mi R-206的表达下调,此外,有研究发现mi R-206过表达可发挥保护心脏的作用。本研究旨在体外观察原花青素B2（PCB2）对亚砷酸钠（NaAsO2）染毒的H9C2心肌细胞中炎症因子和MMPs/TIMPs的调控作用,以及PCB2是否通过升高mi R-206-5p来调控炎症因子和MMPs/TIMPs,从而为心肌纤维化预防及控制提供新靶点。方法通过CCK-8法检测细胞存活率来筛选出PCB2和NaAsO2的合适的处理浓度。将H9C2细胞分成四组:对照（Con）组、NaAsO2组、NaAsO2+PCB2组、PCB2组。免疫荧光法检测H9C2细胞中的Ⅰ型胶原蛋白（Col-Ⅰ）的水平,实时荧光定量PCR和Western blot检测IL-6、TNF-α、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3的基因和蛋白的表达高低。同时实时荧光定量PCR检测mi R-206-5p在NaAsO2染毒和PCB2干预的H9C2细胞中的表达,随后进行转染实验,分组为:Con组、NaAsO2组、NaAsO2+mi R-206-5p mimic组、NaAsO2+mi R-mimic NC组。应用实时荧光定量PCR检测MMP-2、MMP-9、TIMP-2和TIMP-3基因的表达水平,Western blot检测MMP-2、MMP-9和TIMP-3蛋白的表达水平。结果CCK-8实验结果表明NaAsO2处理48小时后,随着NaAsO2染毒剂量的升高,从6μmol/L时开始,H9C2细胞存活率逐渐下降（P＜0.05）。单独的PCB2处理后,H9C2细胞存活率没有明显统计学差异（P＞0.05）。随着PCB2的干预剂量增加,NaAsO2+PCB2组的细胞存活率逐渐增加,当PCB2的浓度为25μg/ml时,细胞存活率上升最显著（P＜0.05）。免疫荧光检测显示:与Con组相比,NaAsO2组的细胞内Col-Ⅰ荧光强度增加,PCB2+NaAsO2组较NaAsO2组荧光强度减弱。实时荧光定量PCR结果显示,与Con组相比,NaAsO2组的IL-6、TIMP-1、TIMP-3、MMP-2的m RNA水平升高（P＜0.05）;MMP-9的m RNA水平降低（P＜0.05）;TIMP-2的m RNA水平无明显变化（P＞0.05）。与NaAsO2组相比,PCB2+NaAsO2组IL-6、TNF-α、TIMP-1、TIMP-3的m RNA水平均降低（P＜0.05）;MMP-9的m RNA水平升高（P＜0.05）;MMP-2的m RNA水平有降低趋势但无统计学意义（P＞0.05）;TIMP-2的m RNA水平无明显变化（P＞0.05）。Western blot结果表明,与Con组相比,NaAsO2组的IL-6、TNF-α、TIMP-1、TIMP-3的蛋白水平升高（P＜0.05）;MMP-9的蛋白水平降低（P＜0.05）;MMP-2的蛋白水平有升高趋势但无统计学意义（P＞0.05）。与NaAsO2组相比,PCB2+NaAsO2组IL-6、TNF-α、TIMP-1、TIMP-3的蛋白水平均降低（P＜0.05）;MMP-9的蛋白水平明显升高（P＜0.05）;MMP-2的蛋白水平有降低趋势但无统计学意义（P＞0.05）。实时荧光定量PCR检测NaAsO2染毒是否下调了H9C2细胞中mi R-206-5p的表达,以及PCB2干预是否通过上调mi R-206-5p来发挥作用。结果表明,NaAsO2染毒后,细胞中mi R-206-5p的表达量显著降低（P＜0.05）,PCB2干预后,细胞中mi R-206-5p的表达量较NaAsO2组有所回升,但无统计学差异（P＞0.05）。随后进行mi R-206-5p模拟物转染实验。实时荧光定量PCR结果表明,与Con组相比,NaAsO2染毒后,MMP-2的m RNA表达水平升高,转染mi R-206-5p mimic后,MMP-2的m RNA水平下降（P＜0.05）;与Con组相比,NaAsO2染毒后,MMP-9的m RNA表达水平降低,转染mi R-206-5p mimic后,MMP-9的m RNA水平显著升高（P＜0.05）;与Con组相比,NaAsO2染毒后,TIMP-3的m RNA表达水平升高,转染mi R-206-5p mimic后,TIMP-3的m RNA水平显著降低（P＜0.05）;NaAsO2染毒前后和mi R-206-5p mimic转染前后TIMP-2的m RNA水平无明显变化（P＞0.05）。Western blot结果表明:与Con组相比,NaAsO2组的MMP-2蛋白水平有升高的趋势但无统计学意义（P＞0.05）,转染mi R-206-5p mimic后,MMP-2的蛋白水平有下降的趋势但无统计学意义（P＞0.05）;与Con组相比,NaAsO2染毒组降低了MMP-9的蛋白水平,升高了TIMP-3的蛋白水平（P＜0.05）,而转染mi R-206-5p mimic后,能够显著改善NaAsO2导致的MMP-9蛋白水平降低,TIMP-3蛋白水平升高（P＜0.05）,以上差异均存在统计学意义。结论1.亚砷酸钠可以上调H9C2心肌细胞中IL-6、TNF-α、TIMP-1、TIMP-3的表达,下调MMP-9的表达,加重Ⅰ型胶原蛋白沉积。2.原花青素B2可以抑制亚砷酸钠诱导的IL-6、TNF-α、TIMP-1、TIMP-3的表达上调,MMP-9的表达下调,缓解Ⅰ型胶原蛋白沉积。3.mi R-206-5p过表达可以调控MMP-9和TIMP-3的表达,缓解NaAsO2造成MMP-9和TIMP-3的平衡失调。