【摘 要】
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前言 第一部分 APAF-1基因与喉鳞癌相关性研究 喉鳞癌细胞存在多种癌基因和抑癌基因异常,对化疗及放疗均不敏感。越来越多的证据表明凋亡异常是肿瘤耐药及产生放化疗副
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前言 第一部分 APAF-1基因与喉鳞癌相关性研究 喉鳞癌细胞存在多种癌基因和抑癌基因异常,对化疗及放疗均不敏感。越来越多的证据表明凋亡异常是肿瘤耐药及产生放化疗副作用的重要原因。APAF-1(apoptotic protease activating factor-1)基因是诱导细胞凋亡的重要基因,参与线粒体介导的凋亡途径。研究证实该基因很少发生突变,引起该基因功能下调的机制有:LOH、微卫星不稳定及启动子甲基化。APAF-1基因表达下调与许多肿瘤相关,但该基因与喉鳞癌发生的关系尚不清楚。我们拟研究APAF-1在喉癌中的表达、缺失及启动子甲基化情况,探讨它与喉鳞癌发生的相关性。 材料与方法 1.实验材料:喉鳞状细胞癌标本来源于中国医科大学附属第一临床医院耳鼻喉科、沈阳市空军463医院耳鼻喉科、沈阳军区总医院耳鼻喉科患者手术切取标本。TRIZOL Reagent、Taq DNA聚合酶、反转录试剂盒、DNA纯化试剂盒购自Promega公司;羊抗鼠Apaf-1-IgG及二抗购自Sant Cruz公司,其他试剂购自Sigma公司。 2.实验方法:应用半定量RT-PCR方法、免疫组化分析Apaf-1表达,杂合性丢失(loss of heterozygosity,LOH)分析喉鳞癌病人APAF-1基因所在的12q22-23区域缺失情况,并用甲基化特异性PCR对该基因启动子区甲基化情况进行研究。 结果 1.喉鳞癌组织中APAF-1 mRNA表达下调:RT-PCR结果表明42例
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