烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus, A. fumigatus)是一种常见重要的室内外过敏原,其孢子体积很小,易于进入呼吸道。孢子在呼吸道定植后,在其发芽和死亡阶段,能释放多种蛋白酶。正因为烟曲霉这些重要特点,使其在控制逐年升高的支气管哮喘(以下均简称哮喘)发病率,以及治疗重症哮喘的研究中显得十分重要。TLR2(toll-like receptor 2, TLR2)属于一种重要的先天性免疫受体家族,能识别烟曲霉菌抗原,并与之结合发生生物学作用的重要受体。而存在于支气管上皮细胞上的TLR2,其作用更不容忽视。但烟曲霉菌在动物体内是如何影响哮喘发生发展,且TLR2在其中发挥怎样的作用,目前对于该方面的研究还没有定论。本课题将初步探讨烟曲霉菌孢子对大鼠哮喘的影响,以及TLR2在其中的作用。第一章烟曲霉菌孢子对哮喘大鼠气道结构和气道阻力的影响目的:探讨烟曲霉菌孢子对哮喘大鼠气道结构和气道阻力的影响。方法:以卵蛋白(ovalbumin, OVA)致敏并激发的方法建立大鼠哮喘模型。70只雄性Wistar大鼠随机分为A和B两大组,分别研究大鼠在OVA激发前或后经鼻滴入烟曲霉菌孢子后,它们的气道结构和气道阻力的改变。测定大鼠气道阻力,以及对乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)的气道反应性。检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中细胞数和上清中总蛋白浓度。病理切片观察大鼠支气管上皮细胞间连接情况,以及支气管壁周炎症细胞浸润和胶原沉积,以及支气管上皮中杯状细胞增生情况。结果:OVA雾化激发前或后接触烟曲霉菌孢子的哮喘大鼠与未接触烟曲霉菌孢子的哮喘大鼠相比,前者的支气管上皮中杯状细胞增生水平和给予Ach后气道阻力变化率明显高于后者。此外,与未接触烟曲霉菌孢子的哮喘大鼠相比,激发前接触烟曲霉菌孢子的哮喘大鼠的BALF上清中总蛋白浓度和支气管周胶原沉积面积显著升高,支气管上皮细胞间连接破坏明显,但这些大鼠的气道炎症并未发生显著改变。然而,激发后接触烟曲霉菌孢子的哮喘大鼠的BALF中中性粒细胞数与未接触烟曲霉菌孢子的哮喘大鼠相比明显升高。结论:烟曲霉菌孢子可以增加哮喘大鼠支气管上皮受损程度、加剧支气管上皮中杯状细胞增生和支气管周胶原沉积、以及增加气道反应性。总之,烟曲霉菌孢子能促进大鼠哮喘发生和加重其发展。第二章烟曲霉菌孢子致哮喘大鼠支气管上皮中Toll样受体2表达的改变目的:烟曲霉菌孢子致哮喘大鼠支气管上皮中TLR2表达的变化。方法:以OVA致敏并激发的方法建立大鼠哮喘模型为基础,而后给予大鼠经鼻腔滴入烟曲霉菌孢子,分别通过RT-PCR和免疫组化方法检测大鼠肺TLR2mRNA水平和支气管上皮TLR2表达水平,以及ELISA方法测定大鼠BALF中白介素-5(interleukin-5,IL-5)含量。结果:烟曲霉菌孢子不但引起了在激发前接触烟曲霉菌孢子的哮喘大鼠肺组织中TLR2 mRNA表达量(0.742±0.050)和BALF中IL-5含量[(624.12±60.2)pg/ml]较未接触烟曲霉菌孢子的哮喘大鼠｛TLR2:(0.571±0.041, P﹤0.05),IL-5:[(436.65±41.2)pg/ml, P﹤0.05]｝明显增多,还导致了大鼠支气管上皮上TLR2蛋白表达量与肺组织中TLR2 mRNA呈一致性变化。但是烟曲霉菌孢子未引起激发后接触孢子的哮喘大鼠肺组织中TLR2mRNA和支气管上皮上TLR2蛋白表达量较未接触孢子的哮喘大鼠明显增多。结论:大鼠肺组织中表达上调的TLR2可能参与了大鼠哮喘的发生。更有意义的是,在雾化吸入前接触烟曲霉菌孢子的哮喘大鼠,其支气管上皮TLR2表达更加上调。因此推测TLR2可能在烟曲霉菌孢子加重实验哮喘大鼠支气管上皮损伤,以及一系列病理生理改变的机制中发挥重要作用。