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背景C反应蛋白(C reactiveprotein, CRP)自从在急性感染者血液中被发现后,因能够反应感染性疾病的动态变化,已被临床上广泛应用于炎症的辅助诊断[1],相关的检测方法、产品不断涌现,但目前获批的CRP定量检测相关产品均需要借助设备来完成,不适合现场、社区医院、乡村等基层医疗机构使用。因此,研究开发不需要借助任何设备即可快速检测CRP含量的胶体金免疫层析试纸条具有重要的临床价值和社会意义。目的建立基于自制比色卡半定量检测CRP含量的双抗体夹心胶体金免疫层析法方法1.CRP比色卡定值点的确定：根据临床诊断标准,确定比色卡三个定值点。2.CRP室内质控品的制备：利用CRP低值血清作为基质血清稀释CRP高值血清,另外添加类风湿因子、三酰甘油等干扰物质制备一系列室内质控品,并采用罗氏试剂进行复核。3.CRP试纸条的制备及工艺优化：采用柠檬酸三钠还原法制备不同粒径的胶体金,采用功能性实验确定胶体金最优粒径、最佳pH和蛋白标记量、最佳蛋白包被量；采用正交实验确定样品垫处理液的成分及含量；通过全血、血浆、血清的稀释倍数研究确定不同标本的稀释倍数,制备比色卡,并在实验基础上将反应体积放大100倍,验证工艺的稳定性。4.试纸条性能评价：选用室内质控品对试纸条的灵敏度、精密性、批间差、特异性、钩状(HOOK)效应、稳定性、检测环境条件等进行研究。5.实验室临床标本检测：从中心标本库选200份临床标本进行检测并与对照试剂对照,确认一致性。结果1.确定CRP比色卡三个定值点由浅到深分别为10 μg/mL、50 μg/ml、10。2.配制CRP室内质控品14份：含类风湿因子(150 IU/mL)、三酰甘油(16mmol/L)和不含干扰因素的CRP终浓度分别为5μg/mL、10 μg/mL、50 μg/mL、100μg/mL。样本共12份,HOOK效应样本(CRP 1046 μg/mL)及低值样本(CRP 0.57 μg/mL)各1份。3.初步建立了比色法检测CRP的试纸条制备方法,选用1.6的胶体金加入0.05%叠氮钠存放,每毫升胶体金加入0.02 M K2CO3 20 μL、标记抗体6μg。包被抗体1.2mg/mL。组条后对样本稀释倍数研究发现血清、血浆稀释200倍、全血稀释120倍后加样75μL检测结果一致。试纸条制备工艺放大实验用室内质控品检测合格。4.试纸条性能检测显示：CRP浓度为5μg/mL时检测线不显色,10μg/mL时显色。采用P1、P2、P3连续3次,显色无差别,且与比色卡相应条带显色一致。类风湿因子(150 IU/mL)、三酰甘油(16 mmol/L)对结果无干扰,CRP浓度1046 μg/mL时无HOOK效应。5.检测200份临床标本并与万孚产品对照,全血、血清、血浆的符合率分别为：50μg/mL以下为100%; 50μg/mL-100 μg/mL之间为93.8%、99%、95.6%；100 μg/mL以上为92.6%、99%、96%。结论建立了可不借助仪器对人血中CRP半定量检测的双抗体夹心胶体金免疫层析方法。该方法通过自制比色卡比色可实现对人全血、血浆、血清中CRP的阈值区间定量。.