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目的运用现代分子生物学实验技术,探讨α-细辛醚抗食管癌作用靶点及机制,为临床运用中药治疗食管癌提供必要的实验依据,同时也为临床治疗食管癌增添一种高效、低毒、价廉的中药制剂。方法1.用不同剂量的α-细辛醚注射液,依次作用在人食管癌细胞株上,四甲基偶氮唑盐法(MTT法)测定Eca-109细胞的增殖抑制率;通过计算细胞增殖抑制率、绘制增殖抑制曲线等,综合分析α-细辛醚对人食管癌细胞系Eca-109细胞增殖活性的影响。2.应用普通倒置显微镜和倒置荧光显微镜技术,观察α-细辛醚作用于人食管癌细胞系Eca-109后,细胞生长状况及形态学变化。3.运用流式细胞术,检测细胞周期及细胞凋亡率,探讨α-细辛醚对人食管癌细胞系Eca-109的增殖抑制的作用及机制。4.采用蛋白免疫印迹技术及荧光定量PCR技术对细胞内的相关蛋白(Caspase-3、Caspase-9、CyclinD1和CDK4)的表达水平进行分析,探讨α-细辛醚对人食管癌细胞株Eca-109的作用机制及与基因表达调控的关系。结果1.α-细辛醚作用在人食管癌细胞系Eca-109显示有明显的抑制细胞生长的作用,与阴性对照组的比较,差异有统计学意义(P﹤0.05);计算表明量效关系明显,回归方程为:Y=0.5376X+4.022,其中,R2=0.993,P=0.000﹤0.05。2.α-细辛醚处理后,可见细胞典型的凋亡改变,细胞缩小、核膜有的厚薄不均或者呈半月形状,另外可见部分细胞膜结构破坏。3.1) α-细辛醚作用24小时后,G0/G1期的细胞数显著升高,跟阴性对照组的比较,差异具有统计学意义(P=0.02﹤0.05);S期的细胞数明显下降,与阴性对照组的比较,差异亦具有统计学意义(P=0.03﹤0.05)。2)凋亡指数和阴性对照组的相比,与剂量的增加成正比,差异有统计学意义(P﹤0.01)。4.蛋白免疫印迹方法和荧光定量PCR法检测α-细辛醚作用后细胞内CyclinD1、CDK4表达量明显减少,Caspase-3、Caspase-9表达量显著增加,差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论1.α-细辛醚作用于人食管癌细胞表现出明显的抑制作用,且其作用是剂量和时间相关性的。2.α-细辛醚作用在人食管癌细胞上对其的增殖有显著的抑制效应,主要表现在两个方面:促凋亡和抑增殖的作用。3.α-细辛醚抑制人食管癌细胞系Eca-109增殖的主要作用机理可能与阻滞细胞的周期在G0/G1期,以及在细胞周期G1→S期检测点的调控因子CyclinD1和CDK4的表达有关。4.α-细辛醚作用于人食管癌细胞株Eca-109对其有促凋亡的作用,它的作用机理可能与上调Caspase-9和Caspase-3表达相关。