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本文对灵芝多糖体外抗肿瘤活性进行了较为系统的研究,阐述了灵芝多糖诱导两种人结肠癌LoVo和HCT-116细胞的死亡机制和其联合抗癌药物5-氟尿嘧啶(5-FU)对细胞的体外抑制作用。结果表明,灵芝多糖对LoVo和HCT-116细胞有明显的细胞毒活性,抑制细胞生长呈时间和剂量依赖性。MTT法、形态学方法、荧光染色、扫描电镜、透射电镜、DNA琼脂糖电泳、迁移能力、线粒体膜电位、酶活力、细胞内钙离子浓度、流式细胞仪及LDH漏出率等实验证实了灵芝多糖诱导HCT-116细胞和LoVo细胞死亡通过诱导细胞凋亡的机制。多种基因、蛋白酶以及各种激酶参与了灵芝多糖诱导结肠癌细胞凋亡的调控过程。①在灵芝多糖诱导LoVo细胞凋亡的过程中,caspaes-3和-9的活力升高,caspaes-3活化,其底物RARP降解,促凋亡蛋白Bax表达增加,抑凋亡蛋白Bcl-2表达降低,Bax/Bcl-2的比值在药物作用12 h后随时间延长而升高,表明灵芝多糖诱导细胞凋亡时激活以线粒体为中心的信号转导途径；②caspaes-8的活力升高,Fas表达升高,说明灵芝多糖诱导LoVo细胞凋亡时激活了死亡受体途径；③ERK MAPK抑制剂、p38 MAPK抑制剂和JNK MAPK抑制剂均对LoVo细胞凋亡有抑制作用,推测灵芝多糖诱导细胞凋亡时也激活了MAPK途径：④灵芝多糖还可将LoVo细胞阻滞于S期；⑤灵芝多糖联合5-FU能协同诱导LoVo细胞凋亡,其作用机理与细胞周期的阻滞有关；⑥灵芝多糖作用于HCT-116细胞后,caspaes-3和。9的活力升高,caspaes-3底物RARP(poly-(ADP-ribose) polymerase)降解,促凋亡蛋白Bax表达增加,抑凋亡蛋白Bcl-2表达降低,Bax/Bcl-2的比值在药物作用12 h后随时间延长而升高,表明灵芝多糖诱导细胞凋亡时激活了线粒体途径；Tcaspaes-8的活力和死亡受体Fas表达升高,推测灵芝多糖诱导HCT-116细胞凋亡时同时激活了FasL及其下游的caspase,激活了死亡受体途径；⑧三种MAPK抑制剂对HCT-116细胞凋亡没有抑制作用,表明MAPK途径没有参与凋亡过程；⑨灵芝多糖还可将HCT-116细胞阻滞于S和Gz/M期；⑩此外,灵芝多糖联合5-FU协同诱导HCT-116细胞凋亡,其作用机理与细胞周期的阻滞有关。综上所述,我们考察了灵芝多糖对人结肠癌细胞的凋亡诱导作用及其机制,发现灵芝多糖可诱导结肠癌细胞凋亡,其中LoVo细胞凋亡与细胞周期阻滞、死亡受体Fas途径、线粒体途径和MAPK途径有关,诱导HCT-116细胞凋亡与细胞周期阻滞、死亡受体Fas途径、线粒体途径有关,并能与5-FU协同诱导两种细胞凋亡。本研究有助于进一步完善对灵芝多糖抗肿瘤作用的了解,为结肠癌的治疗提供依据,并为临床治疗联合用药方案提供新的思路和参考。