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目的:观察补肾活血方对AGEs/缺氧条件下视网膜Müller细胞PEDF及相关因子的影响,并对其作用机制进行初步探讨,为补肾活血方在糖尿病视网膜病变(DR)的临床应用提供一定的实验依据方法:(1)应用改进的酶消化法培养SD大鼠视网膜Müller细胞;采用HE染色、GFAP和GS免疫细胞化学荧光染色进行细胞鉴定。(2)以中药血清药理学方法获得补肾活血方含药血清。(3)实验分为八组:正常对照组、正常中药干预组、低AGEs组、高AGEs组、低AGEs中药干预组、高AGEs中药干预组、模拟缺氧组、模拟缺氧中药干预组。(4)分别在实验干预24h、48h、72h后,运用酶联免疫吸附法(ELISA)对细胞上清液进行血管内皮生长因子(VEGF)、色素上皮衍生因子(PEDF)及白细胞介素-1β(IL-1β)含量的测定。结果:(1)同时段模拟缺氧组、低AGEs组、高AGEs组VEGF浓度与正常对照组比较均升高(P<0.05);同时段缺氧中药干预组较模拟缺氧组VEGF分泌量减少(P<0.05);同时段低AGEs组中药干预较低AGEs组VEGF浓度减少(P<0.05);同时段高AGEs组中药干预较高AGEs组VEGF浓度均减少(P<0.05);各组同一时段VEGF浓度均比前一时间升高(P<0.05)。(2)同时段模拟缺氧组、低AGEs组、高AGEs组PEDF浓度与正常对照组比较均降低(P<0.05);同时段缺氧中药干预组较模拟缺氧组PEDF浓度升高(P<0.05);同时段低AGEs组中药干预较低AGEs组PEDF浓度升高(P<0.05);同时段高AGEs组中药干预较高AGEs组PEDF浓度升高(P<0.05);各组同一时段PEDF浓度均比前一时间降低(P<0.05)。(3)同时段模拟缺氧组、低AGEs组、高AGEs组IL-1β浓度与正常对照组比较均升高(P<0.05);同时段缺氧中药干预组较模拟缺氧组IL-1β浓度均降低(P<0.05);同时段低AGEs组中药干预较低AGEs组IL-1β浓度均降低(P<0.05);同时段高AGEs组中药干预较高AGEs组IL-1β浓度均降低(P<0.05);各组同一时段IL-1β浓度均比前一时间升高(P<0.05)。(4)正常对照组的VEGF与PEDF呈正相关关系(P<0.05),缺氧组、低AGEs组的VEGF与PEDF无明显相关性(P>0.05),高AGEs组的VEGF与PEDF呈负相关关系(P<0.05)。(5)同时段比较,缺氧组、低AGEs组及高AGEs组的VEGF/PEDF比值均较正常对照组增高;同时段比较,缺氧中药干预组较缺氧组VEGF/PEDF的比值降低,高、低AGEs组中药干预分别较高、低AGEs组VEGF/PEDF的比值降低。结论:(1)本实验中,AGEs(终浓度50 mg/L和100mg/L)以及缺氧均可导致视网膜Müller细胞分泌VEGF增加、PEDF减少,IL-1β增高,并且这种改变在高AGEs组比低AGEs组更明显。(2)在AGEs(终浓度50 mg/L和100mg/L)以及缺氧条件下,补肾活血中药复方含药血清可降低视网膜Müller细胞VEGF的表达以及IL-1β的分泌,提高PEDF蛋白的表达,这可能是补肾活血法防治DR的药物干预途径之一。(3)本实验中,正常状态下视网膜Müller细胞的VEGF与PEDF呈动态平衡;AGEs(50mg/L和100mg/L终浓度)以及缺氧条件下不仅使视网膜Müller细胞VEGF与PEDF的动态平衡均被打破,并且AGEs对视网膜Müller细胞VEGF与PEDF动态平衡的损害程度与AGEs浓度有关。(4)补肾活血中药含药血清可减轻在AGEs(终浓度50 mg/L和100mg/L)以及缺氧条件下VEGF与PEDF的不平衡,这可能是其防治DR的一个重要作用机制。