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川贝母为百合科植物川贝母Fritillaria cirrhosa D.Don、暗紫贝母Fritillaria unibracteata Hsiao et K. C. Hsia、甘肃贝母Fritillaria przewalskii Maxim.、梭砂贝母Fritillaria delavayi Ftanch.、太白贝母Fritillaria taipaiensis P. Y. Li或瓦布贝母Fritillaria unibracteata Hsiao et K. C. Hsia var. wabuensis (S. Y. Tang et S. C. Yue) Z. D. Liu, S.Wang et S.C.Chen的干燥鳞茎,是我国名贵的道地性药材。因其独特的止咳化痰、清热散结、养肺润肺的功效而驰名中外,其主要活性成分为甾体生物碱。近年来,由于受到盲目的开采,川贝母野生资源破坏极为严重,加之其生境独特,生长周期长且有效成分含量低的特点,野生资源大部分处于濒危或渐危状态,导致药用资源供不应求。大量研究表明,内生真菌既能产生与宿主相同或相似的化学成分,还能产生具有新颖结构的活性化合物,是新药发现的重要化合物资源库。本课题组以生于海拔3000~5000m的濒危高原药材川贝母的四种原植物(川贝母、暗紫贝母、甘肃贝母、梭砂贝母)为研究对象,以期从中分离出产川贝类生物碱或新型活性化合物的菌株,为进一步合理有效开发利用川贝母资源提供一定科学依据。主要研究结果如下:(1)从暗紫贝母、甘肃贝母、川贝母、梭砂贝母的健康鳞茎中依次分离到15、13、6、4种内生真菌,说明暗紫贝母健康鳞茎的内生真菌种类最丰富,梭砂贝母内生真菌的多样性相对较单一。研究同种植物鳞茎的不同部位的内生真菌多样性发现,外层鳞叶内生真菌的多样性比内层鳞叶更为复杂,种类更繁多,株系更丰富。(2)对分离到的内生真菌发酵后,利用特异性生物碱沉淀试剂和薄层层析(TLC)技术检测发酵液中的生物碱,结果发现,9株内生真菌(A1、A2、A3、All、A14、 G6、C1、C2、C4)能代谢产生生物碱。然而,在乙酸乙酯---甲醇---浓氨水---水(18:2:1:0.1)的展开条件下,除了菌株A14产生了一个与贝母素甲(Rf:0.732)迁移率相同的斑点外,其它生物碱斑点并不能与药材川贝母的生物碱相对应。(3)结合形态学特征和ITS序列信息鉴定9株产生物碱的内生真菌,结果发现7株内生真菌为镰刀属真菌,其中,A1为三线镰刀菌Fusarium tricinctum, A3为锐顶镰刀菌Fusarium acuminatum, G6为接骨木镰刀菌Fusarium sambucinum,菌株C1、C2、C4、A14的形态学特征及遗传信息不足以将其分类到种,均鉴定为镰刀属Fusarium sp真菌,A2、A11属于粘帚霉属Gliocladium sp真菌。(4)以五株病原菌(金黄色葡萄球菌Staphyloccocus aureus,大肠杆菌Escherichia coli,白色念珠菌Candida albicans,铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa,粪肠球菌Enterococcus faecalis)为指示菌,采用琼脂孔法测定9株内生真菌的总生物碱的抑菌活性发现,7株内生真菌产生的生物碱仅对金黄色葡萄球菌有抑制作用,且镰刀属的真菌(A1、A3、A14、G6、C4)对其抑制作用较强,而粘帚霉属真菌(A2、A11)的抑菌效果中等。此外,菌株A14及菌株G6产生的生物碱成分还能一定程度地抑制粪肠球菌的生长;菌株C4代谢的生物碱成分对白色念珠菌有明显的抑制作用。(5)通过柱层析法从菌株A1的代谢产物中分离、纯化得到5个化合物,其结构经过气相-质谱(GC-MS)及核磁共振(NMR)技术分析,结合前人的研究结果,推断其中三个化合物的结构分别为:5α,8α-epidioxy-(22E,24R)-ergosta-6,22-dien-3β-ol,24(R)-methylcholesta-5-en-3β-ol(菜油甾醇),24(R)-methylcholesta-5,22-en-3β-ol(菜子甾醇),另外两个化合物的结构有待进-步确定。利用琼脂孔法分别测试5个化合物对5株病原菌的抑菌作用,结果显示均无活性。