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目的:癫痫(epilepsy, EP)是一组由大脑神经元异常放电引起的以短暂性中枢神经系统功能失常为特征的慢性脑部疾病。癫痫对人类的健康和经济发展构成很大的威胁。目前对癫痫的治疗仍以各种抗癫痫药物(anti-epileptic drugs,AEDs)为主,而且大部分患者需要长期服药治疗,这些药物在体内经过肝肾代谢,所以长期服药就会加重肝肾的负担,给患者带来福音的同时,不可避免的出现了药物的二重损害,产生相关的副作用。因此,近年来抗癫痫药物引起的肝肾功能损害越来越受到临床医生的关注。本实验用戊四氮(Pentetrazole, PTZ)点燃Sprague Dawley (SD)大鼠,应用抗癫痫药物丙戊酸钠(valproate sodium, VPA)、苯妥英钠(phenytoin, PHT)和拉莫三嗪(lamotrigine, LTG)干预癫痫大鼠,观察各种药物对痫性发作的控制情况,并采用免疫组织化学方法检测丙戊酸钠、苯妥英钠、拉莫三嗪治疗后的癫痫大鼠和对照组大鼠的肝肾细胞凋亡的差异,探讨丙戊酸钠、苯妥英钠、拉莫三嗪对大鼠肝肾细胞凋亡的影响及可能的机制,为避免药物造成肝肾损害及指导临床医生选择抗癫痫药物提供理论依据。方法:35只SD大鼠随机分为5组,每组7只。随机选取1组作为正常对照组(NS组);另4组为实验组,随机分为癫痫对照组(PTZ组)、丙戊酸钠组(VPA组)、苯妥英钠组(PHT组)、拉莫三嗪组(LTG组)。采用戊四氮致痫的大鼠癫痫模型,NS组腹腔注射生理盐水,其余4组腹腔注射戊四氮,持续2周。然后NS组和PTZ组给予生理盐水灌胃,VPA组、PHT组和LTG组给予药物灌胃,持续3周,完成干预。观察戊四氮点燃大鼠的发作情况并对其进行Racine分级评分,评价药物对癫痫发作的控制程度,采用HE染色方法观察肝肾组织大体结构的改变,采用免疫组织化学方法检测药物干预后的癫痫大鼠的肝肾中Bax和Bcl-2的表达情况,并计算凋亡率。结果1 PTZ点燃大鼠的行为特征:实验组大鼠平均在7~9次注射PTZ后出现1~2级惊厥发作;注射PTZ12~15次后,惊厥发作强度增强、频率逐渐增加,继而进入大发作期,发作持续数分钟后可短时缓解,随后又反复发作;整个发作持续约30~50 min后逐渐缓解,发作停止后,动物可自行活动。NS组大鼠注射生理盐水后无任何发作迹象和抽搐表现,行为正常。2药物干预后对癫痫的控制:NS组无抽搐发作;PTZ组抽搐持续发作;PHT组有2只(1/3)持续发作,死亡1只;其他2组的抗癫痫药物对癫痫发作控制良好,经灌胃治疗后抽搐发作次数减少或无抽搐发作。3大体结构:肝脏由四叶组成,灌注前呈紫红色,灌注后呈淡黄色,表面光滑,未见肿胀、结节及肿物生长,各组动物肝脏所占体重比例比较无统计学意义(P>0.05)。肾脏呈蚕豆状,表面光滑,无结节,各组动物肾脏所占体重比例比较无统计学意义(P>0.05)。4 HE染色结果:VPA组动物肝脏组织切片在低倍镜下观察,见肝脏及肝细胞基本结构正常,胞浆内近圆形的空泡变性,细胞核被压向一侧,空泡变性细胞阳性率与其他四组比较明显升高,差异有显著统计学意义(P<0.05)。肾脏组织切片在低倍镜下观察,其基本结构正常,与其它组相比未见明显异常,余4组动物的肝肾组织切片观察均正常。5免疫组织化学染色结果:阳性凋亡细胞胞膜完整,胞浆呈棕色或棕黄色着染,为细小颗粒状或弥漫均匀染色,细胞核染色质致密,形状不一,大小不等,形成团块状边集于核膜处,各阳性凋亡细胞形态尚规则,于凋亡细胞周围可见呈圆形或卵圆形、胞浆浓缩、可有或无核碎片的凋亡小体。6肝细胞Bax与Bcl-2的表达LTG组、PHT组、VPA组、PTZ组、NS组动物的Bax染色阳性率分别为0.283±0.021,0.090±0.036,0.300±0.101,0.103±0.042,0.097±0.031,其中LTG组和VPA组阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05),PHT组、PTZ组和NS组三组阳性率比较差异也无统计学意义(P>0.05),LTG组、VPA组两组阳性率较PHT组、PTZ组、NS组三组阳性率明显升高,差异有显著统计学意义(P<0.05)。LTG组、PHT组、VPA组、PTZ组、NS组动物的Bcl-2染色阳性率分别为0.080±0.026,0.373±0.096,0.090±0.036,0.377±0.012,0.327±0.060,其中LTG组和VPA组阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05),PHT组、PTZ组和NS组三组阳性率比较差异也无统计学意义(P>0.05),LTG组、VPA组两组阳性率较PHT组、PTZ组、NS组三组阳性率明显降低,差异有显著统计学意义(P<0.05)。7肾脏细胞Bax与Bcl-2表达阳性结果LTG组、PHT组、VPA组、PTZ组、NS组动物的Bax染色阳性率分别为0.100±0.026,0.047±0.038,0.430±0.036,0.060±0.010,0.054±0.054,其中LTG组、PHT组、PTZ组、NS组四组阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05),而VPA组与上述四组比较阳性率明显升高,差异有显著统计学意义(P<0.05)。LTG组、PHT组、VPA组、PTZ组、NS组动物的Bcl-2染色阳性率分别为0.360±0.030,0.357±0.074,0.133±0.047,0.327±0.032,0.370±0.010,其中LTG组、PHT组、PTZ组、NS组四组阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05),而VPA组与上述四组比较阳性率明显降低,差异有显著统计学意义(P<0.05)。结论1本实验用戊四氮制作癫痫大鼠模型,在腹腔注射约1周时出现1~2级惊厥发作,2周时出现5级惊厥发作,说明成功点燃此模型大约需要2周时间。2采用药物干预癫痫大鼠发现VPA、LTG对癫痫控制情况良好,PHT控制情况不良。3采用HE染色方法观察肝肾大体结构,发现VPA组动物肝脏细胞出现明显的空泡变性,说明VPA影响脂类在肝脏中的代谢,提示VPA导致的肝损伤可能与肝脏长期脂肪变性有关。4采用免疫组织化学方法染色Bax和Bcl-2表达阳性细胞,计算凋亡率,发现VPA组肝肾细胞凋亡率均明显增加,LTG组肝细胞凋亡率明显增加,说明VPA促进肝肾细胞的凋亡,LTG促进肝细胞的凋亡,提示VPA引起肝肾损伤、LTG引起损伤肝可能与细胞凋亡增多有关。