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第一部分 气道高反应性动物模型的建立及检测 目的：基于气道上皮稳态假说，通过臭氧应激损伤气道上皮细胞，建立新型气道高反应性动物模型。 方法：12只新西兰兔随机分为两组，(1)臭氧攻击组：将动物暴露于2.0ppm臭氧中攻击3天，每天1小时。(2)正常对照组。末次攻击后12小时用乙酰甲胆碱雾化吸入激发气道反应，RM-6240C生物信号采集系统实时、动态观测跨肺压和气流量，计算气道阻力，收集肺泡灌洗液进行细胞计数、分类，总蛋白，IL-1含量测定及肺组织病理切片，以证实气道高反应性的存在。 结果：①臭氧应激组动物激发后，气道阻力增加，呼气阻力增加程度更明显。②肺泡灌洗液中总蛋白、IL-1含量升高，细胞总数及各细胞分类均高于正常对照组。③肺组织病理切片可见臭氧应激组动物支气管腔狭窄，气道上皮脱落，肺泡、肺间质中大量炎细胞浸润。 第二部分 降钙素基因相关肽及其受体在气道高反应性形成中的时空分布 目的：探讨降钙素基因相关肽在气道高反应性形成中的作用。 方法：将25只新西兰兔随机分为五组，分别臭氧攻击0、1、2、4、8天，每天1h，采用放射免疫法检测肺组织匀浆中CGRP含量，RT-PCR测定肺内CGRPRlmRNA表达改变，原位杂交法观察CGRPRl mRNA阳性细胞肺内分布。 结果：①放射免疫结果显示，臭氧应激使肺组织匀浆中CGRP浓度24h内迅速升高，并于应激第二天达到峰值，之后缓慢下降，应激第八天降至正常水平；②RT-PCR结果显示，随应激时间的延长，肺内CGRPRl mRNA表达逐渐增强，于应激第4天达到峰值，之后逐渐下降，应激第八天降至正常水平；③原位杂交结果显示，臭氧应激0天组阳性反应细胞主要均匀分布于肺间质、支气管上皮细胞，血管及支气管平滑硕士学位论文 摘 要肌亦有少量表达。随应激时间的延长，镜下可见阳性反应细胞分布不均，多呈散在的片装或灶状集中于气管、血管周围。臭氧应激第八天，肺组织表达CGRPRI mRNA阳性细胞明显减少。 第三部分 血管活性肠肚及其受体在气道高反应性 形成中的时空分布目的：探讨血管活性肠肽在气道高反应性形成过程中的作用。方法：25只新西兰兔随机分为五组，分别臭氧攻击0、1、2、4、S天，每天1小时。采用放射免疫法检测肺组织匀浆中VIP含量，RT干CR测定肺内VIPRlmRNA表达改变，原位杂交法观察VIPRI m删阳性细胞肺内分布。结果：①臭氧应激第一天肺组织匀浆中VIP浓度未见明显改变，随应激时间延长，VIP浓度逐渐增高，于第四天达最高值，四天后开始下降，第八天降至正常水平；②与肺组织匀浆中UP含量变化相似，VIPRI mRNA表达经历了先增加后降低的双向过程，随应激时间的延长，表达逐渐增强，应激2～4天表达达到峰值，之后逐渐下降，应激第八天降至正常水平；③臭氧应激0天组动物肺间质、支气管上皮细胞、血管内皮细胞、平滑肌细胞均有VIPRI mRNA表达，分布均匀。臭氧应激第一天，肺内染色阳性细胞分布未见明显改变，应激2～4天，阳性细胞分布不均，呈斑片状集中于气管、血管周围，染色强度增加，肺泡腔内亦可见阳性染色细胞，至臭氧应激第八天，阳性染色细胞减少。