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目的比较胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)与脑源性神经营养因子(BDNF)在诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经样细胞分化的差异性,继以载GDNF、绿色荧光蛋白(GFP)基因重组腺病毒转染BMSCs,观察转染后GDNF基因在细胞内的表达情况及对细胞生长、分化的影响。方法采用全骨髓贴壁法联合连续半换液法获取BMSCs,流式细胞技术进行鉴定细胞表型分子。分别制备含GDNF(浓度为lOng/ml)及BDNF(浓度为10ng/ml)培养液诱导BMSCs,体外诱导BMSCs分化3天后,免疫荧光技术检测各诱导组中细胞对神经元烯醇化酶(NSE)的表达情况,诱导细胞分化5天后,免疫荧光技术检测微管蛋白-2(MAP-2)的表达情况,诱导7天后观察骨髓间充质干细胞向神经样细胞转化情况,计算转化率并做统计学分析,诱导9天后观察各诱导组中BMSCs对NSE与MAP-2共表达情况,并在诱导过程中以MTT法分析诱导组中细胞活力的变化情况,将各检测指标与空白对照组比较,收集数据并作统计学分析。进一步采用载rGDNF-GFP基因重组腺病毒转染BMSCs,转染后不同检测时间点观察转染效果,测算转染效率,并评估转染后细胞活力变化情况,并与未转染对照组比较,收集数据并作统计学分析。其中,转染5天、10天后PCR检测rGDNF基因在BMSCs内的表达情况,并分别在转染后5、10天后观察转染组中BMSCs对NSE、MAP-2的表达情况,并与对照组比较。结果全骨髓贴壁法结合连续半换液法可获取纯度高、活力好、形态较为统一的贴壁细胞,流式细胞技术鉴定结果表明该贴壁细胞为骨髓间充质干细胞。外源性GDNF和BDNF可诱导BMSCs表达NSE、MAP-2,但在GDNF诱导后BMSCs活力较高,细胞向神经样细胞形态转变趋势亦更为显著,此外GDNF可对BMSCs维持较长时间分化状态,较BDNF诱导组与空白对照组有统计学差异性。载rGDNF-GFP基因重组腺病毒转染BMSCs后,目的基因GFP的表达随转染时间的延长逐渐增强,于转染后72h接近表达高峰,之后逐渐下降。PCR结果显示转染后BMSCs对GDNF的表达逐渐增强,MTT检测结果提示载rGDNF-GFP基因重组腺病毒转染BMSCs5天后后,转染组细胞活力较对照组显著提高,并存在统计学差异性,PCR检测结果表明转染10天后BMSCs对GDNF的表达较转染后5天明显增强。免疫荧光技术鉴定结果表明载rGDNF-GFP基因重组腺病毒转染BMSCs5天后,细胞对NSE阳性表达,10天后对MAP-2阳性表达。结论GDNF与BDNF可在体外诱导BMSCs表达神经样细胞标志性蛋白分子,但GDNF诱导后BMSCs在细胞活力、分化程度、向神经样细胞形态转变以及分化状态的维持方面优于BDNF。载目的基因腺病毒转染BMSCs后,BMSCs内源性GDNF表达显著增强,在内源性GDNF的作用下BMSCs的活力增强,并促使BMSCs向神经样细胞自行分化。