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2000年~2002年,通过田间葡萄杂交与播种育苗,获得玫瑰香×黑龙江实生的F1代19株及北醇自交后代47株。运用RAPD技术,对中国野生葡萄12个种58个株系、欧洲葡萄20个品种、欧山杂交品种1个、欧美杂交品种2个、河岸葡萄2个株系及三个杂交组合(玫瑰香×黑龙江实生、北醇(?)、燕山(♀)×河岸-3)的122株F1代共计205份材料进行了中国野生山葡萄抗寒基因分子标记研究。主要结果如下: 1.按照前人对中国野生葡萄抗寒性较系统的鉴定分析,首先以极抗寒亲本黑龙江实生(山葡萄)、不抗寒亲本玫瑰香(欧洲葡萄)及抗寒欧山杂种北醇为模板筛选引物。通过对110个随机引物的筛选,获得7个特异性引物。进一步用7个特异性引物对15份极抗寒野生葡萄种质及部分不抗寒野生种质扩增,结果显示,引物S241在供试的山葡萄9个株系及燕山(♀)中扩增出一条约670bP特异性DNA片段;另一个引物S238在山葡萄的6个株系中扩增出一条约800 bp特异性DNA片段。然后以三个杂交组合玫瑰香×黑龙江实生、北醇(?)及燕山(♀)×河岸-3的122株F1代及其亲本为模板,引物S241分别在三个组合的部分后代中扩增出来自极抗寒亲本(山葡萄、燕山葡萄)的670 bp特异性DNA片段;引物S238分别在前两个组合的部分后代中扩增出来自极抗寒亲本(山葡萄)的800 bp特异性DNA片段,这表明S241670和S238800是与中国野生葡萄抗寒基因相连锁的RAPD标记。进一步以欧洲葡萄品种、中国野生葡萄株系、河岸葡萄株系、欧美杂种为试材,对所获RAPD标记的遗传特性进行了研究。结果证明这两个RAPD标记是来自中国野生葡萄山葡萄,且可以向后代遗传。抗寒基因RAPD标记也可以用作山葡萄做亲本的抗寒育种分子标记辅助选择的依据。RAPD标记S241670。较S238800有着更广泛的辅助选择作用。 2.中国野生葡萄抗寒基因RAPD标记的分离与遗传表现,表明抗寒性是多基因控制的数量性状遗传。 3.建立了适于葡萄抗寒基因RAPD分析的反应体系:在25μl反应混合液中,含模板DNA 25 ng,Mg2+2.5 mM,dNTPs 0.25mM,Taq DNA聚合酶1.0 U,随机引物1μl。