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目的:探讨阿司匹林与miRNA-15b对人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231裸鼠移植瘤生长(如增殖、凋亡、转移等)的影响。 方法:构建过表达 miRNA-15b质粒表达载体,采用体外细胞培养法培养MDA-MB-231,建立人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231裸鼠皮下移植瘤模型,观察miRNA-15b与阿司匹林单独治疗及联合治疗对移植瘤生长的影响,定期观察测量肿瘤体积变化,记录最终肿瘤体积、质量及计算抑癌率,用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组乳腺癌组织细胞凋亡率,用荧光定量PCR法检测各组乳腺癌组织miRNA-15b和EZH2 mRNA表达情况,用免疫组化方法检测各组乳腺癌组织EZH2、PCNA和MVD表达情况。 结果:1.成功构建重组的质粒表达载体pcDNA6.2-miRNA-15。 2.所有裸鼠均在接种后5~8d内成瘤,成瘤率100%,肿瘤随时间的延长而增大,肿瘤生长曲线显示:对照组相比,各治疗组均能抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,尤其以联合治疗组抑制肿瘤生长的作用最为明显。 3.最终体积与瘤重显示:空白对照组与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);各治疗组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);miRNA-15b组与阿司匹林组比较,差异有统计学意义(P<0.05);联合治疗组与 miRNA-15b组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。各组的抑瘤率分别为:阿司匹林组43.47%、miRNA-15b组60.38%、联合治疗组72.13%。 4.各组移植瘤细胞凋亡率的结果显示:空白对照组与阴性对照组移植瘤的早期凋亡率比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);各治疗组与对照组移植瘤的早期凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05);miRNA-15b组与阿司匹林组移植瘤的早期凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05);联合治疗组与miRNA-15b组移植瘤的早期凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05);miRNA-15b组与阴性对照组、阿司匹林组和联合治疗组移植瘤的晚期凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05);miRNA-15b组和联合治疗组与其它处理组移植瘤的总凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。 5.荧光定量PCR结果显示:各处理组之间移植瘤EZH2 mRNA的表达比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);空白对照组、阴性对照组和阿司匹林组各组之间移植瘤miRNA-15b的表达比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);miRNA-15b组、联合治疗组与其它处理组之间移植瘤 miRNA-15b的表达比较,差异有统计学意义(P<0.05);miRNA-15b组与联合治疗组之间移植瘤miRNA-15b的表达比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。 6.免疫组化结果:(1)EZH2结果:空白对照组、阴性对照组和阿司匹林组各组之间比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);miRNA-15b组、联合治疗组与其它处理组之间比较,差异有统计学意义(P<0.05);miRNA-15b组与联合治疗组之间比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。(2)PCNA和MVD结果:空白对照组与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);各治疗组与对照组移植瘤比较,差异有统计学意义(P<0.05); miRNA-15b组与阿司匹林组比较,差异有统计学意义(P<0.05);联合治疗组与miRNA-15b组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论:1、在体内,重组真核表达质粒pcDNA6.2-miRNA-15b能降低乳腺癌裸鼠移植瘤瘤体EZH2的蛋白表达水平。 2、miRNA-15b介导的抑制 EZH2基因翻译在一定程度上可降低乳腺癌裸鼠移植瘤瘤体的体积和质量,促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤增殖与转移。 3、联合应用阿司匹林时,可增强抑瘤作用,但具体作用机制还有待验证。 4、基因治疗作为一种肿瘤的治疗手段,具有良好的应用前景,EZH2有望成为乳腺癌治疗的新靶点。