论文部分内容阅读
本文系统地对金樱子多糖进行提取、分离纯化以及化学修饰，并研究金樱子多糖及其衍生物的体外抗肿瘤活性。本研究将促进金樱子资源的综合利用，为新型植物活性多糖在食品与医药中的应用提供理论依据。主要研究内容如下：
1、金樱子多糖组分RLP的制备
分别采用了活性炭、H<,2>O<,2和>DEAE-52三种方法对金樱子粗多糖进行脱色，结果显示，DEAE-52的脱色效果最好，其脱色率大于95％，而且DEAE-52还有纯化多糖的作用。
分别采用了Sevag法、酶法和酶-Sevag法结合对金樱子粗多糖进行脱蛋白，结果表明，对金樱子粗多糖脱蛋白的最佳方法是酶-Sevag法结合，酶法与Sevag法交替进行5次蛋白脱除率达88.06％。
采用DEAE-52和DEAE-Sepharose FF凝胶柱层析法对金樱子粗多糖进行纯化，获得多糖组分RLP(Rosa laevigata Michx Polysaccharide)，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法和凝胶色谱法鉴定RLP具有较高纯度。凝胶渗透色谱法测定RLP的重均分子量Mw为227kDa。红外光谱分析结果显示，金樱子多糖RLP为β-D-构型的吡喃糖。
2、金樱子多糖RLP衍生物的制备
通过对金樱子多糖RLP进行硫酸酯化、羧甲基化、盐酸降解，并对其降解产物进行羧甲基化，分别得到取代度为1.305的硫酸化多糖SF-RLP，取代度为0.428的羧甲基化多糖CM-RLP，重均分子量Mw为38005Da的降解多糖DG-RLP和取代度为1.501的羧甲基化降解多糖CMDG-RLP；采用红外光谱分析结果显示：SF-RLP，CM-RLP和CMDG-RLP相对于未改性的金樱子多糖均有各自取代基的特征吸收峰，而盐酸降解只会降低多糖的分子量，并不会改变多糖的主链结构。
3、金樱子多糖RLP及其衍生物的抗肿瘤活性研究
通过MTT法考察了金樱子多糖及其衍生物对SKVO、HepG2和LoVo三种肿瘤细胞生长的抑制作用。结果表明，RLP在浓度0～50ug/mL的范围内，对三种肿瘤细胞生长有一定的抑制作用，而改性后的金樱子多糖衍生物对三种肿瘤细胞生长的抑制作用均有提高。当药物浓度为50ug/mL时，SF-RLP、CM-RLP、DG-RLP与CMDG-RLP对SKVO细胞生长的抑制率分别为66.4％、37.5％、79.6％和72.5％；在相同给药浓度下，该四种衍生物均能极其显著地抑制HepG2生长，其抑制率分别为55.22％，87.79％，73.2％和63.1％；SF-RLP和CMDG-RLP对LoVo细胞生长的抑制率与药物浓度呈明显剂量依赖关系，两者对LoVo细胞的IC<,50>值分别为49.32ug/mL和35.92ug/mL。