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第一部分CD44V6和CK19基因表达与非小细胞肺癌血行微转移的相关研究目的：检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)癌组织和外周血中CD44V6和CK19基因的表达,探讨CD44V6和CK19基因表达与NSCLC外周血微转移的关系及其临床意义。方法：随机选择56例NSCLC患者,应用免疫组织化学技术检测NSCLC组织中CK19、CD44V6基因表达,同时采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测NSCLC外周血中CK19mRNA、CD44V6mRNA表达情况；采集20例肺部良性病变患者正常肺组织和外周血作对照。结果：1.CD44V6基因在NSCLC组织中表达显著高于良性病变正常肺组织(P<0.001),CD44V6高表达与TNM分期(P=0.005)、淋巴结转移(P=0.024)有关。CK19在NSCLC组织和良性病变肺组织均为高表达,与临床病理特征未见相关性,无统计学差异。2. NSCLC患者外周血中CD44V6mRNA及CK19mRNA的阳性表达率分别为64.29%(36/56)、57.14%(32/56),均显著高于对照组(P<0.05)。CD44V6mRNA在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期NSCLC中阳性表达率分别为35.71%、66.67%、86.67%,其阳性表达率与临床分期(P=0.016)、淋巴结转移(P=0.02)有关；CK19mRNA在ⅠⅡ、Ⅲ期NSCLC中阳性表达率分别为28.57%、59.30%、80.0%,其阳性表达与临床分期有关(P=0.019)。3.CD44V6和CK19在NSCLC组织中表达与外周血中表达均呈正相关(P<0.05), NSCLC外周血中CD44V6mRNA与CK19mRNA表达成正相关(P=0.002)；CD44V6mRNA与CK19mRNA联合检测阳性率为75.0%,优于单基因检测。结论：CD44V6和CK19基因在NSCLC癌组织和外周血中表达较高,CD44V6高表达与NSLCL的侵袭转移特性相关,CD44V6mRNA和CK19mRNA联合检测有助于提高阳性率,可作为检测NSCLC患者外周血循环肿瘤细胞的分子标志物。第二部分手术操作对非小细胞肺癌术中血行微转移的影响目的：探讨NSCLC肺静脉血中循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)定量检测方法,以及手术操作对非小细胞肿癌血行微转移的影响。对象和方法：随机选择30例可手术NSCLC患者,随机分为先结扎肺静脉组和先结扎肺动脉组,以CD44V6和CK19基因作为检测标志物,采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RTPCR)技术检测手术前、后期肺静脉血中,CK19mRNA和CD44V6mRNA表达情况,同时采集15例健康志愿者外周血作对照。结果：1.NSCLC患者肺静脉血中,CD44V6mRNA和CK19mRNA分别为7.93±1.7010.76±2.74,显著高于对照组外周血,差异有统计学意义(P<0.05)。2.肺动脉先结扎组CD44V6mRNA和CK19mRNA在手术前、后期分别为7.92±1.97vs5.67±2.11和11.21±3.14vs8.60±4.02,肺静脉先结扎组CD44V6mRNA和CK19mRNA在手术前、后期分别为7.95±1.91vs7.74±2.10和10.60±3.15vs10.30±2.98。肺静脉先结扎组在手术前后CD44V6和CK19,两者表达均无差异性(P>0.05),肺动脉先结扎组CD44V6mRNA、CK19mRNA表达在手术后期均显著高于手术前期(P≤0.05)结论：非小细胞肿癌患者肺静脉血中可检测到循环肿瘤细胞,手术操作可能促进了血行微转移,先结扎肺静脉后结扎肺动脉一定程度可减少血行微转移。第三部分非小细胞肺癌细胞毒T淋巴细胞抗原-4基因多态性以及与血行微转移的相关研究目的：探讨NSCLC患者细胞毒T淋巴细胞抗原4(Cytotoxic T-lymphocyte antigen-4, CTLA-4)基因多态性的特点以及与血行微转移的关系。方法：采用PCR-RFLP方法检测158例NSCLC患者(包括第二部分30例NSCLC患者)和72例健康对照者CTLA-4+49A>G基因分型。结果：1.CTLA-4+49A>G基因多态的分布CTLA-4+49A>G基因多态的3种基因型在肺癌NSCLC患者中分布分别为：GG型44.30%(70/158),GA型41.77%(66/158)和AA型13.92%(22/158),对照组分布为：GG型48.6%(34/72),GA型41.7%(31/72)和AA型9.7%(7/72)。NSCLC患者中携带CTLA-4+49AA基因型者频率高于对照组(P=0.046),与GG基因型相比,携带AA型基因型者的相对危险度为1.489(95%CI,0.977-2.060)2. CTLA-4+49A>G基因多态与NSCLC临床病理特征以及血行微转移的关系CTLA-4+49A>G多态与NSCLC患者性别、病理类型、临床分期、肿瘤标记物(CEA、CYFRA21-1)、CK19mRNA以及CD44V6mRNA表达均无显著相关(P>0.05)。结论：CTLA-4+49A>G基因多态与NSCLC临床病理特征及血行微转移未见明显相关,CTLA-4+49AA基因型可能是NSCLC的遗传易感基因,与NSCLC的发生有关。