猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus, PRRSV)引起的。表现为母猪生殖衰竭和仔猪、成年猪呼吸困难,是影响养猪业最大的传染病之一。PRRSV易变异,是单股正链RNA病毒,可引起猪的持续性感染和免疫抑制,具有抗原变异性、嗜巨噬细胞性、抗体依赖性增强作用(Antibody-dependent enhancement, ADE)等特征,在猪体内,PRRSV主要入侵肺泡巨噬细胞,这与猪肺泡巨噬细胞上的特异性病毒受体有关。受体是病毒侵入的首要门户,目前在猪肺泡巨噬细胞上已被确认的受体有3种：唾液酸粘附素(Sialoadhesin, Sn)硫酸乙酰肝素(Heparin sulphate, HS)和CD163分子。HS协助PRRSV吸附到PAM细胞上,Sn受体介导PRRSV的内吞及吸附,CD163分子协助Sn受体内吞并使PRRSV的囊膜与细胞膜融合后建立通道帮助PRRSV脱衣壳,将病毒基因组RNA释放到细胞浆中。PRRSV与Sn受体的结合是实现内吞的必要步骤。本研究首先用在线软件对猪唾液酸粘附素受体Sn的理化性质、跨膜结构、信号肽、蛋白肽的亲水性、抗原指数、表面可能性及柔韧性、结构域及基序进行预测。确定猪Sn受体体外原核表达的可能性,在兼顾猪唾液酸粘附素受体结构域的情况下将猪Sn受体分段原核表达,制备抗相应结构域的多克隆抗体,运用DEAE-纤维素离子交换层析技术将制备的鼠源抗唾液酸粘附素受体血清纯化,去除杂蛋白,纯化血清中的免疫球蛋白IgG。为确定猪唾液酸粘附素受体Sn在病毒感染中的作用,本研究获得体外猪肺泡巨噬细胞,将制备纯化的鼠抗猪Sn各结构域的抗体分别封闭处理PAM细胞,PRRSV感染24h和48h后用已建立的PRRSV SYBR Green Ⅱ实时荧光定量PCR方法检测细胞中病毒的增殖情况。结果显示,与对照组鼠阴性IgG封闭PAM细胞相比,接种病毒24h及48h后,各段结构域封闭后对病毒增殖的抑制作用不一。已有的报道证明Sn N段V-set结构域在PRRSV感染中发挥重要功能,本实验结果将Sn N段封闭后,病毒略有抑制作用但差异不显著；软件预测的Sn受体17个结构域中第9、10、13段结构域抑制作用较明显；结构域联合封闭后对病毒的抑制作用显著,说明唾液酸结构的完整性对病毒感染更重要,单独封闭的结构域部分也有抑制作用,暗示这部分结构域可能有其特有的功能,可能与病毒的粘附有关,但更需要重复试验与研究。在此基础上,我们制备了不同浓度的感染性免疫复合物,探索Sn受体和CD163分子在感染性免疫复合物感染宿主靶细胞中是否发挥作用,当感染性免疫复合物做2倍和4倍稀释时,Sn各结构域混合封闭组与对照组相比病毒拷贝数下降,差异显著：当感染性免疫复合物做8倍稀释时,Sn各结构域混合封闭组与对照组相比略高,但差异不显著：将Sn受体和CD163分子联合封闭处理PAM细胞,48h后病毒增殖的抑制作用比单独封闭Sn受体或者CD163分子的抑制作用更明显。单独封闭Sn受体或CD163分子及联合封闭Sn受体和CD163分子后,PRRSV-IgG组病毒含量不但没有升高,反而下降,且联合封闭下降更明.显,说明,Sn可以在一定程度上调节感染性免疫复合物对机体的作用,Sn受体和CD163分子在感染性免疫复合物进入宿主靶细胞时具有协助和促进作用。有研究不同物种Sn受体介导PRRSV进入细胞的可能性,除了猪Sn受体,鼠Sn受体和人Sn受体也有结合PRRSV的能力。实验操作中PRRSV抗原抗体双阴性猪不易获得,且PRRSV可能是小鼠乳酸脱氢酶增高症病毒(LDV)变异种经过中间宿主野猪获得感染了家猪,本研究对PRRSV感染小鼠模型进行了探讨：将浓缩纯化的PRRSV病毒通过滴鼻感染、皮下注射、尾静脉注射免疫小鼠。在注射病毒后第2、4、6、8、10天处死,采集病料,收集小鼠的血清、脾脏、肺泡巨噬细胞。RNA提取、RT-PCR扩增及PRRSV核酸检测。结果显示,PRRSV对鼠肺泡巨噬细胞只有吸附作用。说明,PRRSV进入宿主细胞的受体中,Sn在介导病毒内吞中发挥作用,但病毒在宿主中感染与否还需要其他受体协作发生。