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目的:测定南瓜蛋白(Cucurmosin,CUS)对体外培养的人慢性粒细胞白血病K562细胞的增殖抑制作用;建立人慢性粒细胞白血病K562细胞-NOD/SCID小鼠的血液模型和皮下移植瘤模型,并用于评价南瓜蛋白在小鼠体内的抗慢粒活性;为南瓜蛋白潜在的抗慢性粒细胞白血病的临床应用提供理论基础和实验依据。方法:采用MTT比色法,以天花粉蛋白(trichosanthin, TCS)为对照,测定CUS对体外培养的K562细胞的增殖抑制作用。皮下注射K562细胞并多次接种传代,建立K562细胞NOD/SCID小鼠的皮下移植瘤模型。采用X射线照射后尾静脉注射K562细胞的方法,建立人慢性粒细胞白血病NOD/SCID小鼠的血液模型;通过外周血细胞和骨髓细胞瑞氏染色、髓系抗原的流式细胞仪检测、组织病理及RT-PCR检测bcr/abl融合基因等方法对血液模型进行鉴定。分别使用皮下移植瘤模型和血液模型评价CUS在小鼠体内的抗K562活性。结果:南瓜蛋白对体外培养的K562细胞具有明显的增殖抑制作用,强于同类的天花粉蛋白,并且表现为时间和剂量依赖性;CUS处理24h、48h和72h的IC50分别为8.59 mg/L、3.85 mg/L和2.39mg/L。皮下注射K562细胞并多次接种传代,建立K562细胞NOD/SCID小鼠的皮下移植瘤模型。静脉注射5周后小鼠体重下降明显,活动欠佳。部分动物可见瘤块侵犯,例如眼眶、小腿,卵巢等;血常规白细胞计数与外周血镜下所示基本一致,白细胞计数不与建模天数成正比。照射后,外周血白细胞极低。所见以成熟粒系为主,且外周血象仅见一次幼稚细胞;外周血中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色积分甚低,以排除感染可能;骨髓细胞增生活跃,油镜下观察所示,幼稚细胞明显;骨髓细胞髓系抗原(CD13、CD33和CD117)动态监测结果显示,空白组(照射未注射K562细胞)髓系抗原表达没有明显变化,而阴性组(照射且注射K562细胞)的髓系抗原表达渐进升高,与建模天数呈正相关,阴性组小鼠濒死状态髓性抗原表达亦明显升高;肝脾组织流式细胞术监测CD33表达,空白组和阴性组没有差别,CD33百分比较低且无变化;雌性小鼠癌肿常侵犯卵巢,将癌肿侵犯脏器组织及肝、脾、肺、肾行病理检查可示癌肿侵犯脏器呈典型肿瘤组织形态,而肝、脾、肺、肾未见癌肿侵犯及明显异常;RT-PCR检测bcr/abl融合基因,骨髓、癌肿侵犯脏器以及k562细胞可见bcr/abl融合基因条带,而肝、脾和外周血未见bcr/abl融合基因条带。小鼠体内实验结果显示:CUS对K562细胞的皮下移植瘤和血液模型均具有显著抑制作用;给药剂量为0.5mg/kg和1mg/kg的CUS对人慢粒皮下移植瘤的抑瘤率分别为53.45%和59.43%;而剂量为0.25mg/kg和0.5mg/kg的CUS给药组小鼠的生存时间分别延长24.9%和36%。结论:1、CUS对体外培养的K562细胞具有明显的增殖抑制作用,并表现为时间和剂量依赖性。2、人慢性粒细胞白血病K562细胞-NOD/SCID小鼠血液模型的鉴定方法应以骨髓涂片、骨髓细胞髓性抗原流式检测、骨髓标本bcr/abl融合基因检测为主。3、CUS在小鼠体内对人慢性粒细胞白血病细胞系K562具有显著的抑制作用。