【摘 要】
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背景:间充质干细胞(MSC)具有多向分化潜能,并且在组织损伤的修复中发挥了重要作用。前期研究中我们构建了高迁移率族蛋白1(HMGB1)高表达的MSC(MSC-H细胞)用于治疗大鼠放射性血管损伤(RVI),我们发现MSC-H细胞治疗RVI的过程中表现出强大的迁移能力和向内皮细胞(EC)分化的能力,促进了血管损伤的修复。目的:研究HMGB1调控MSC-H细胞迁移和向内皮细胞定向分化的相关机制。方法:进
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背景:间充质干细胞(MSC)具有多向分化潜能,并且在组织损伤的修复中发挥了重要作用。前期研究中我们构建了高迁移率族蛋白1(HMGB1)高表达的MSC(MSC-H细胞)用于治疗大鼠放射性血管损伤(RVI),我们发现MSC-H细胞治疗RVI的过程中表现出强大的迁移能力和向内皮细胞(EC)分化的能力,促进了血管损伤的修复。目的:研究HMGB1调控MSC-H细胞迁移和向内皮细胞定向分化的相关机制。方法:进行体外EC-MSC共培养实验后,通过检测MSC-H细胞CD31表达和LDL摄取能力验证MSC-H细胞向EC分化。Transwell实验分析MSC-H细胞的迁移能力。Western blot检测MSC-H细胞培养上清中HMGB1的含量。使用HMGB1中和抗体后再利用上述方法检测MSC-H细胞的向EC分化和迁移能力。基因芯片分析MSC-H细胞相对于对照组MSC-C细胞的差异表达基因,以及共培养前后MSC-H细胞和MSC-C细胞的差异表达基因。通过GO分析进一步筛选影响MSC-H细胞迁移能力的分子,并选择调变倍数最大的分子,针对筛选出的分子利用抑制剂检测其对MSC-H细胞迁移的影响。结果:体外EC-MSC共培养实验证明了MSC-H细胞具有良好的向EC分化潜能。MSC-H细胞培养上清中HMGB1的含量升高,使用HMGB1中和抗体后,MSC-H细胞向EC分化及迁移能力受到抑制。GO分析提示在MSC-H细胞中产生差异表达并且与迁移相关的分子中,电压门控钙型离子通道α1H亚基(CACNA1H)的表达量升高最显著。敲减HMGB1后CACNA1H表达量下降,选择性T型钙离子通道阻滞剂可以抑制MSC-H细胞的迁移能力。结论:HMGB1修饰的MSC-H细胞的体外迁移和向EC分化能力增强。HMGB1通过自分泌的方式促进MSC-H细胞的迁移和向EC分化。HMGB1可能通过增加CACNA1H的表达促进MSC-H细胞的迁移。
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