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人类冠状病毒HKU1属于冠状病毒亚科β属A组群冠状病毒,主要引起人类自限性上下呼吸道感染,在免疫系统受损或低下的人群中情况更为严重,特别是哮喘病人和新生儿童。冠状病毒基因组编码复制酶蛋白基因、结构蛋白基因和附属蛋白基因。复制酶多蛋白被主蛋白酶和附属蛋白酶切割成16个非结构蛋白,进而组装成复制、转录复合体,介导病毒传播。非结构蛋白9(nsp9)是一种 DNA/RNA结合蛋白,在病毒复制转录过程中起着至关重要的作用。β属冠状病毒基因组3‘非翻译区(UTR)存在两个保守性的二级结构——凸出茎环和假结。在研究小鼠肝炎病毒基因组3‘非翻译区的过程中发现假结处6个碱基(AACAAG)的插入会造成病毒几近死亡,病毒传代实验中发现一个病毒回复突变体U13017G(nsp9 N60K)能救活病毒,但是其挽救病毒的机制未知。小鼠肝炎病毒nsp9蛋白结构尚未被解析,但N60在β属冠状病毒nsp9蛋白一级序列中是相对保守的。因此,选择人类冠状病毒HKU1 nsp9为模型,研究nsp9与病毒基因组3’UTR的相互作用机制。 此篇论文以人类冠状病毒HKU1非结构蛋白9为研究对象,构建N60K克隆,通过一系列表达纯化手段,获得了纯度较高的HCoV-HKU1 nsp9 N60K蛋白。经过反复的结晶尝试晶体,获得衍射分辨率高达2.6埃的蛋白晶体。