口蹄疫（Foot and mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus,FMDV)引起的偶蹄动物的一种人兽共患传染病，可以导致被感染的家畜生产机能严重下降，相关畜产品品质不佳，并且严重影响畜产品及其相关产品的国际贸易，给国民经济带来巨大冲击。目前，对口蹄疫的防治主要是以灭活疫苗为主，但是随着防疫标准的不断提高，以及出于生物安全的考虑，传统疫苗暴露出了一系列的问题。因此，研制新型的基因工程疫苗显得异常重要。为鉴定O型FMDV衣壳抗原的耐酸稳定性相关位点，通过改变相关位点以提高衣壳抗原在家蚕杆状病毒表达系统（Bombyx mori baculovirorus expression system）中的表达量，最终研制基因亚单位疫苗。本研究利用PH6.0的PBS对FMDV O/ON/CHA/株进行酸化处理，经Tris（PH7.6）中和后，通过中性红蚀斑克隆技术得到两株耐酸性单克隆毒株S-A和S-B。将二者的P1基因与未酸化处理的原毒的P1基因进行序列比对，在编码衣壳蛋白的P1基因上发现4个突变位点，其中VP1的N17D和VP2的D86H氨基酸突变为两株共有，且为错义突变；位于VP3和VP4上两个突变未导致氨基酸改变。合成P12A2B3C基因，将其中的两个错义突变的位点进行替换，密码子优化后，构建穿梭质粒pVL-P12A2B3C，与线性化的Bm-BacPAK6DNA共转染家蚕的BmN细胞，收获重组病毒Bm-P12A2B3C。免疫荧光检测显示，外源基因获得正确表达。用重组毒感染5龄的家蚕幼虫，双抗体夹心ELISA法检测家蚕淋巴血，可成功检测到O型FMDV衣壳抗原，1:640稀释时为阳性，高于对照组的1:80，且其保存时间也明显提高。为进一步研究影响O型FMDV衣壳抗原高效表达的相关区域，以能高效表达衣壳抗原的AsiaⅠ型/HNK/CHA/05FMDV的P12A2B3C为骨架，将O型FMDV的5个主要抗原位点以四种组合形式替换到该骨架上，四种形式分别为：VP1全部替换；VP2上的13个氨基酸及VP1；VP3上的3个氨基酸及VP1；VP1及VP2的13个氨基酸和VP3的3个氨基酸全部替换。之后按照先前的方法在家蚕体内表达衣壳抗原，经检测，可成功表达嵌合抗原，四种嵌合抗原1:320稀释后均为阳性。VP1替换后，表达量较AsiaⅠ型大幅下降，表明VP1可能是影响O型FMDV衣壳抗原在家蚕体内高效表达的主要区域。