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【目的】观察流感嗜血杆菌体外生物被膜的形成,并测定氟喹诺酮类药物莫西沙星、加替沙星、左氧氟沙星和环丙沙星对流感嗜血杆菌生物被膜的影响。在体外实验的基础上,依次建立金黄地鼠肺气肿模型和慢性阻塞性肺病急性发作模型,检测体内生物被膜的形成,并进一步观察莫西沙星对慢性阻塞性肺病急性发作动物模型体内流感嗜血杆菌生物被膜的影响。【方法】(1)从慢性阻塞性肺病急性发作患者痰液中分离流感嗜血杆菌,采用结晶紫法和扫描电镜观察流感嗜血杆菌体外生物被膜的形成。(2)微量肉汤稀释法测定不同药物对流感嗜血杆菌的最低抑菌浓度,观察氟喹诺酮类药物对流感嗜血杆菌生物被膜形成和破坏的影响,以及莫西沙星对生物被膜内细菌的杀菌作用。(3)采用气管内注入弹性蛋白酶法建立金黄地鼠肺气肿模型,制作流感嗜血杆菌琼脂小珠,将其注入肺气肿动物肺内建立慢性阻塞性肺病急性发作的动物模型,测定随时间延长肺组织炎症程度和菌落计数的变化,利用扫描电镜观察气道表面生物被膜的形成。(4)气管内注入流感嗜血杆菌建立慢性阻塞性肺病急性发作动物模型,观察莫西沙星治疗后,肺组织病理和气道表面生物被膜的变化,同时测定炎症因子和菌落计数的改变。【结果】(1)从慢性阻塞性肺病急性发作患者痰液中分离得到流感嗜血杆菌临床株可在体外培养24-48小时形成成熟、致密、典型的生物被膜,不同菌株形成生物被膜的能力有所不同,扫描电镜可在固相支持物表面见到由大量细菌和其分泌的胞外粘质形成的模样结构,并可见到粘液丝和孔道结构。(2)流感嗜血杆菌对氟喹诺酮类、阿奇霉素、氨苄西林、头孢噻肟和利福平敏感,氟喹诺酮药物可在体外抑制流感嗜血杆菌生物被膜的形成,并有一定的破坏作用;其中莫西沙星随药物浓度的升高,生物被膜吸光度值逐渐降低,4mg/L以上浓度的药物可明显减轻生物被膜程度;另外莫西沙星对处于生物被膜内的细菌仍有强大的清除作用,在0.25mg/L以上浓度膜内活菌数明显减少,细菌清除作用呈剂量效应关系。扫描电镜也证实莫西沙星可明显减轻生物被膜的程度。(3)成功建立肺气肿动物模型,病理学检查可见到肺泡结构紊乱,肺泡大小不等,肺泡管、肺泡囊和肺泡明显扩张,肺泡壁变薄,肺泡间隔不同程度的断裂,肺泡腔融合增大,部分融合成肺大泡,符合全小叶型肺气肿,与正常组相比,模型组的肺泡数/视野明显减少,平均肺泡面积和平均内衬间隔明显增大(P<0.01)。在此基础上,经气管注入流感嗜血杆菌构建慢性阻塞性肺病急性发作的动物模型,随时间延长,肺气肿动物肺内炎症持续存在;肺泡灌洗液中活菌计数结果显示,与正常动物感染相比,感染后1-3周内,灌洗液中细菌数明显较高(104.14±0.26 vs.102.47±0.31,P<0.05);肺组织匀浆活菌计数结果显示,正常动物注入细菌后细菌数逐渐减少,3周后没有分离到细菌,而模型动物感染后,细菌得不到清除,1-3周内均可分离出较多的细菌(P<0.05);扫描电镜观察,3周后在气道表面形成生物被膜样结构。(4)莫西沙星可有效治疗流感嗜血杆菌感染所致的肺气肿动物的急性发作,镜下可见到炎症程度减轻;1周后血浆中炎性因子水平明显降低(P<0.05),支气管肺泡灌洗液中炎性因子水平也有不同程度降低,其中IL-8水平早期就有明显减少;菌落计数结果显示,1周内灌洗液中没有分离到活菌,肺组织匀浆中活菌数也明显下降(P<0.05),3周后,细菌数量均再次恢复;但扫描电镜没有发现生物被膜样结构。此外,莫西沙星对气管内放置的硅胶管表面形成的生物被膜也有抑制作用,表现为用药后硅胶管表面分离的细菌数较少(P<0.05),扫描电镜也发现在莫西沙星作用下硅胶管表面无法形成成熟的生物被膜,仅见散在的细菌粘附于管壁上,个别有细菌的散在团状聚集,但尚未融合呈膜状。【结论】从慢性阻塞性肺病急性发作患者痰中分离的流感嗜血杆菌可在体外形成典型的生物被膜;通过细菌感染肺气肿动物模型可建立慢性阻塞性肺病急性发作的动物模型,并且随时间延长,细菌数量仍维持在较高水平,同时在气道表面可找到体内生物被膜形成的证据。结合体内外实验的结果,可认为下呼吸道流感嗜血杆菌生物被膜的形成与慢性阻塞性肺病的急性发作密切相关,是导致感染反复出现、病情迁延、治疗效果不完全的重要机制之一。氟喹诺酮类药物对流感嗜血杆菌浮游菌以及生物被膜内的细菌均具有强大的杀菌作用,体外及动物体内研究提示,莫西沙星可作为对抗流感嗜血杆菌生物被膜感染的有效抗菌药物应用于慢性阻塞性肺病急性发作的治疗。