重组钙调节激素基因质粒对蛋鸡骨钙代谢的研究

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为检测重组钙调节激素基因质粒与鸡体钙代谢间的关系,实验通过酶切和PCR双重鉴定重组鸡CT和PTH真核表达质粒pCEP4-CT和pCEP4-PTH的完整性后,对两种重组质粒经提取纯化后进行蛋鸡腿部肌肉注射,每两周一次,共三次,并在每次注射前经翅静脉取血样,对血样中CT,PTH,E2及钙磷进行测定分析,实验结束时每组选一只鸡取其左右胫骨进行密度,灰分,钙,磷进行测定分析,根据体内钙调节激素以及其他相关激素和骨骼指标的变化来分析两个重组真核表达质粒调节鸡骨钙代谢的机理。试验结果:①53周龄到56周龄新扬州蛋鸡血清钙、磷及雌二醇水平呈下降趋势,血清钙从4.24±0.64mg/dl下降至4.01±0.69mg/dl;血磷浓度从1.38±0.11mg/dl下降至1.27±0.24mg/dl;雌二醇从87.84±9.6pg/ml下降为76.55±5.31pg/ml,但差异均不显著。而血清CT浓度则从59.24±10.6pg/ml上升至69.74±7.62pg/ml,差异虽也不显著,但提示有逐渐上升的趋势。血清PTH的浓度则出现了先上升(从26.27±3.23ng/dl上升至34.32±2.17ng/dl)和后下降(从35.30±3.21ng/dl下降至23.67±2.39ng/dl)的变化表现,且在53周与54周和55周与56周之间的差异显著。②经酶切和PCR双重鉴定结果证明重组质粒中含有降钙素,甲状旁腺素cDNA且是完整的。③在正常蛋鸡日粮钙水平(含钙3.5%,高钙处理组)条件下,注射重组CT质粒后青年蛋鸡血清CT的平均浓度为42.13pg/ml,极显著地高于同处理对照组的平均浓度35.14pg/ml(P<0.01);在低钙(含钙1.5%)日粮条件下注射重组CT质粒后,老年蛋鸡血清PTH的平均浓度为32.49ng/dl,明显高于同处理对照组的平均浓度23.38ng/dl(P<0.05);无论是高钙曰粮还是低钙日粮,注射重组质粒后对蛋鸡骨密度、骨矿含量均有改善趋势,青年蛋鸡对注射重组质粒后的反应均明显,高钙青年蛋鸡对照组、重组CT处理组和重组PTH处理组的BMD分别为0.128g/cm2、0.139g/cm2和0.137g/cm2;低钙青年蛋鸡对照组、重组CT处理组和重组PTH处理组的BMD分别为0.098g/cm2、0.108g/cm2和0.116g/cm2。而老年蛋鸡则只对注射重组PTH质粒的反应明显,高钙老年蛋鸡对照组、重组CT处理组和重组PTH处理组的BMD分别为0.103g/cm2、0.103g/cm2和0.125g/cm2。低钙老年蛋鸡对照组、重组CT处理组和重组PTH处理组的BMD分别为0.091g/cm2、0.099g/cm2和0.096g/cm2。结论:重组激素基因质粒在体内的表达产物具有弥补内源激素分泌不足和改善机体骨钙营养代谢状况的作用。
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