【摘 要】
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单宁酶是水解单宁酯键的酶,用途广泛,具有重要的商业价值.该研究用PCR方法从米曲霉(Aspergillus oryzae)ZD中扩增到单宁酶基因编码完整成熟肽的DNA序列,与米曲霉TH的单宁酶基
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单宁酶是水解单宁酯键的酶,用途广泛,具有重要的商业价值.该研究用PCR方法从米曲霉(Aspergillus oryzae)ZD中扩增到单宁酶基因编码完整成熟肽的DNA序列,与米曲霉TH的单宁酶基因序列比较,有两个核苷酸不同,从而推测出它们之间有一个氨基酸差异.构建含有Tannase基因的原核表达质粒pPET21a-Ta,以包涵体形式在大肠杆菌(Escherichia coli)中获得表达.表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,分子量为62kD.复性后的重组蛋白,经活性检测,没有酶活性.同时构建含有Tannase基因的酵母表达质粒pPCIZα-TA,在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)中以分泌形式表达单宁酶.少量诱导培养酵母转化子,对培养物上清进行活性检测,有较强的单宁酶活性.另外,含有Tannase基因的重组酵母在含有单宁的诱导表达培养基平板上生长时,在菌落周围出现明显的透明降解圈.单宁酶在真核系统的表达表现出很大的潜力,相比天然单宁酶的产量低、生产成本高的缺点,利用高效的表达系统生产重组单宁酶有着广阔的前景.
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