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非甾体类抗炎药(NSAIDs)是花生四烯酸的关键限速酶环氧化酶(COX)的抑制剂。到目前为至,发现COX有2个异构体,COX-1是正常细胞的组成蛋白,参与合成正常细胞活动所需的前列腺素(PGs),起着生理性管家的功能。而与COX-1相反,COX-2通常在正常组织中不表达或表达很少,当受到诱导后可大量的产生。近年来研究发现肿瘤组织或癌前病变组织中COX-2表达明显增加,提示了COX-2与肿瘤的发生有密切关系。流行病学和实验研究发现,NSAIDs特别是COX-2选择性抑制剂具有明显的抑制肿瘤生成作用。如长期服用阿斯匹林或其它的NSAIDs(10到15年以上),可使人患结肠癌相对危险度降低40-50%。在其它肿瘤中,如胃癌、乳腺癌、前列腺癌、及卵巢癌等均显示了相似的结果。 NSAIDs在膀胱癌中的研究不多。有动物实验研究发现,celecoxib具有抑制老鼠的膀胱肿瘤生长。但是否选择性COX-2抑制剂比非选择性COX-2抑制剂具有更强的抗膀胱肿瘤作用,以及它们是否有促进化疗药疗效的研究尚未见报道.故此我们研究了COX-2非选择性抑制剂消炎痛(IN),和COX-2选择性抑制剂celecoxib以及联合丝裂霉素(MMC)对膀胱肿瘤T24细胞株的作用。 方法 1,MTT法测定细胞生长抑制率。 . 浙江大学硕土研究生毕业论文 观察 IN(50u M,100u回,200卜回,400u M,800u M)、celecoxib(25 p回,50p M,互加 p回,200p回,400 u M)及二甲亚矾(DMSO)(0.4%) 作用膀脱肿瘤T24细胞株12小时、24小时、48小时、72小时后的生长 抑制率,以及二H(50卜胆、200卜回、80op回)、。eleC。Xlb(25p回、100p回、 400 u M)联合 MMCZ.5 n g灿l作用膀恍肿瘤 T24细胞株 48 ’J’时后对的生 长抑制率。 2,流式细胞仪(annexin V-FITC、PI荧光染色分析)检测。 分析 IN(50 n M,200 u M,800 n M)。elecoxib(25 u M,100 u M, 400 V回)作用膀耽肿瘤T24细胞株2小时、12小时、24小时后的凋亡率。 3,AO几B荧光染色法检测。 观紊 IN(50 11N,200 P回,800 P回)作用膀肮肿瘤 T24细胞株 24 .J’ 时后凋亡情况。 结果: 一、IN、C616COXib对膀眯肿瘤T24细胞株的生长抑制作用 二、IN 的作用结果:IN在低浓度时(50 u回),对细胞生长抑制不明 显,当浓度为200 V M 时,作用72 小时后抑制率为32.17%士2.97$ (P(o.05),80o卜回的IH在24小时抑制率为47.82$士2.48%(P<o.05), 而此浓度在72小时则抑制率为85.43$士1.09%(P<o.05)。而ouSO的(浓 度 0.4%)并无抑制肿瘤细胞生长作用(P>0.05)。 2、Celecoxib 的作用结果:。elecoxib在低浓度(25 u回)作用 12 小时就显示出了抑制膀肮肿瘤细胞生长(抑制率为 5.90%士 1.69%OP<o.05),而当浓度为so卜回 作用24 小时的抑制率为22.38%士O.66%”~(p<0.05),当延长到 72小时抑$率上升到 31.76$士1.84$(p<0.05)。 400 u M的 celecoxib作用 72 ,J’时肿瘤细胞生长抑制率为 61.64%士二.25% (P<0.05)。 3、同浓度的IN的celec。xfo的作用差别比较:Ce二e。。db的肿瘤细胞 生长抑制能力仍比IN强。50u回的IN和。elecoxib在作用72’J’时后,两者 抑制率相差达27.68$士3.06%)。而当浓度上升为400 V M时作用72小时后细 2 浙江大学硕士研究生毕业论文 胞生长抑制率,相差为6.37$士4.02%,但两者的差距减小(差值比P<0.05)。 二、IN、celecoxib联合*C对膀肮癌细胞生长抑制率的影咱。 l、单独 MMC(2.5 u g/ML)处理 T24细胞株 48 ’J’时后的生长抑制率为 20.28$士二.97%。当 IN50 u M时,单独 IN的细胞生长抑制率为 0.02%士 2.19$,两者合用细胞生长抑制率达26.sl$士1.70%(P<0.05)。同样在 IN200 p M 时,对细胞生长抑制率由单独用IN 的25.69%士2.46%升到 78.94%士1.60%(P<0.05),INS00VM 时对胞生长抑制率由单独用 IN 的