论文部分内容阅读
非甾体类抗炎药(NSAIDs)是花生四烯酸的关键限速酶环氧化酶(COX)的抑制剂。到目前为至，发现COX有2个异构体，COX-1是正常细胞的组成蛋白，参与合成正常细胞活动所需的前列腺素(PGs)，起着生理性管家的功能。而与COX-1相反，COX-2通常在正常组织中不表达或表达很少，当受到诱导后可大量的产生。近年来研究发现肿瘤组织或癌前病变组织中COX-2表达明显增加，提示了COX-2与肿瘤的发生有密切关系。流行病学和实验研究发现，NSAIDs特别是COX-2选择性抑制剂具有明显的抑制肿瘤生成作用。如长期服用阿斯匹林或其它的NSAIDs(10到15年以上)，可使人患结肠癌相对危险度降低40-50％。在其它肿瘤中，如胃癌、乳腺癌、前列腺癌、及卵巢癌等均显示了相似的结果。 NSAIDs在膀胱癌中的研究不多。有动物实验研究发现，celecoxib具有抑制老鼠的膀胱肿瘤生长。但是否选择性COX-2抑制剂比非选择性COX-2抑制剂具有更强的抗膀胱肿瘤作用，以及它们是否有促进化疗药疗效的研究尚未见报道．故此我们研究了COX-2非选择性抑制剂消炎痛(IN)，和COX-2选择性抑制剂celecoxib以及联合丝裂霉素(MMC)对膀胱肿瘤T24细胞株的作用。 方法 1，MTT法测定细胞生长抑制率。 ． 浙江大学硕土研究生毕业论文 观察 IN（50u M，100u回，200卜回，400u M，800u M）、celecoxib（25 p回，50p M，互加 p回，200p回，400 u M）及二甲亚矾（DMSO）（0．4％） 作用膀脱肿瘤T24细胞株12小时、24小时、48小时、72小时后的生长 抑制率，以及二H（50卜胆、200卜回、80op回）、。eleC。Xlb（25p回、100p回、 400 u M）联合 MMCZ．5 n g灿l作用膀恍肿瘤 T24细胞株 48 ’J’时后对的生 长抑制率。 2，流式细胞仪（annexin V－FITC、PI荧光染色分析）检测。 分析 IN（50 n M，200 u M，800 n M）。elecoxib（25 u M，100 u M， 400 V回）作用膀耽肿瘤T24细胞株2小时、12小时、24小时后的凋亡率。 3，AO几B荧光染色法检测。 观紊 IN（50 11N，200 P回，800 P回）作用膀肮肿瘤 T24细胞株 24 ．J’ 时后凋亡情况。 结果： 一、IN、C616COXib对膀眯肿瘤T24细胞株的生长抑制作用 二、IN 的作用结果：IN在低浓度时（50 u回），对细胞生长抑制不明 显，当浓度为200 V M 时，作用72 小时后抑制率为32．17％士2．97＄ （P（o．05），80o卜回的IH在24小时抑制率为47．82＄士2．48％（P＜o．05）， 而此浓度在72小时则抑制率为85．43＄士1．09％（P＜o．05）。而ouSO的（浓 度 0．4％）并无抑制肿瘤细胞生长作用（P＞0．05）。 2、Celecoxib 的作用结果：。elecoxib在低浓度（25 u回）作用 12 小时就显示出了抑制膀肮肿瘤细胞生长（抑制率为 5．90％士 1．69％OP＜o．05），而当浓度为so卜回 作用24 小时的抑制率为22．38％士O．66％”～（p＜0．05），当延长到 72小时抑＄率上升到 31．76＄士1．84＄（p＜0．05）。 400 u M的 celecoxib作用 72 ，J’时肿瘤细胞生长抑制率为 61．64％士二．25％ （P＜0．05）。 3、同浓度的IN的celec。xfo的作用差别比较：Ce二e。。db的肿瘤细胞 生长抑制能力仍比IN强。50u回的IN和。elecoxib在作用72’J’时后，两者 抑制率相差达27．68＄士3．06％）。而当浓度上升为400 V M时作用72小时后细 2 浙江大学硕士研究生毕业论文 胞生长抑制率，相差为6．37＄士4．02％，但两者的差距减小（差值比P＜0．05）。 二、IN、celecoxib联合＊C对膀肮癌细胞生长抑制率的影咱。 l、单独 MMC（2．5 u g／ML）处理 T24细胞株 48 ’J’时后的生长抑制率为 20．28＄士二．97％。当 IN50 u M时，单独 IN的细胞生长抑制率为 0．02％士 2．19＄，两者合用细胞生长抑制率达26．sl＄士1．70％（P＜0．05）。同样在 IN200 p M 时，对细胞生长抑制率由单独用IN 的25．69％士2．46％升到 78．94％士1．60％（P＜0．05），INS00VM 时对胞生长抑制率由单独用 IN 的