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水牛分为沼泽型和河流型两大类,沼泽型水牛染色体数目为2n=48,河流型水牛染色体数目为2n=50,两种不同染色体数目的水牛杂交产生F1代其染色体数目全部为2n=49。F1代与河流型水牛级进杂交、或三种不同染色体数目的水牛相互杂交产生后代其染色体数目分别为2n=48,2n=49,2n=50。本实验对其培养条件和后续步骤进行优化、筛选,进一步提高实验的效率和准确率,获得128头杂交水牛染色体数目,并对三种染色体数目杂交水牛泌乳性能、繁殖性能、体尺等指标进行关联分析,旨在为制定奶水牛培育方案提供理论依据。此外,由于外周淋巴细胞培养的核型分析方法操作烦锁,本研究通过扩大水牛样本量,对本实验室前期所找到的PCR-RFLP的酶切点位进行验证,旨在获得操作简便、准确可靠的核型分析方法。主要研究内容和结果如下:1.分析出128头水牛的染色体数目,发现53头2n=50(41.41%),46头2n=49(35.93%),29头2n=48(22.66%)。2.分析影响外周淋巴细胞培养的核型分析效果的因素,发现肝素、低渗时间、离心机转速、水牛的年龄等对核型分析效果有影响。在冬季,肝素添加量最优条件为成年牛140μl(500U/m L),犊牛在260μl(500U/ml),低渗时间在40分钟左右时,获得的分裂相较好。当转速在800-1000(r/min),离心时间在8min得到的分裂相较多。3.比较三种核型的水牛在头胎的繁殖性能,发现核型2n=49的群体,配种指数为1.89,第1、2胎间距为497天,明显高于其他两种核型的水牛。4.比较三种核型的水牛在头胎的泌乳性能,发现核型2n=50的水牛,头胎泌乳期为247天,显著高于2n=49核型水牛。同样,在头胎产奶高峰期的泌乳量和前三个月的泌乳量显著高于其他两种核型水牛。5.比较三种核型水牛的体尺,发现核型2n=48的水牛,尻长(44.73cm)明显大于2n=50的水牛。核型2n=50的水牛,腹围(241.13cm)和体斜长(143.24cm)明显低于其他两种核型的水牛,前乳头间距和后乳头间距明显大于其他两种核型的水牛。6.运用PCR-RFLP技术进行验证,发现RBP3-4+位点识别2n=48核型水牛的准确率为85.19%,RBP3-4+识别2n=49核型水牛的准确率为64.2%,RBP3-2位点识别2n=50核型水牛的准确率为80.95%。