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[研究目的]微小RNA(microRNA, miRNA)是一类长度约19-25nt的小分子非编码RNA,通过负性调节其靶基因的表达水平参与多种生理、病理过程。近年的研究表明,许多miRNA具有癌基因或抑癌基因活性,在肿瘤发生和发展过程中发挥重要作用。前期我们用Real Time PCR发现在与正常癌旁组织相比人宫颈癌组织中miR-7表达水平发生明显下调。在上述基础上,本研究旨在深入研究miR-7对HeLa和C-33A细胞生长表型的影响,进一步确定miR-7直接作用的靶基因,从而阐明miR-7在宫颈癌发生和发展中作用的可能分子机制。[研究方法]在宫颈癌细胞中过表达miR-7,利用MTT、细胞集落形成及凋亡实验检测细胞增殖和凋亡的变化。之后综合利用生物信息学方法和BLAST方法预测出miR-7的候选靶基因,并利用荧光报告载体实验验证miR-7对其靶基因的直接调控作用。通过Real-time PCR和Western blot技术检测宫颈癌HeLa和C-33A细胞过表达miR-7后靶基因mRNA水平和蛋白水平的表达变化,进一步确定miR-7对靶基因的调控作用。最后,用过表达质粒或敲降质粒改变XIAP的表达水平后,利用MTT实验、细胞集落形成实验和TUNEL实验检测细胞增殖和凋亡的变化,进一步研究靶基因的功能。[研究结果]在宫颈癌HeLa和C-33A细胞中,过表达miR-7后,细胞活性均明显受抑制,并且集落形成能力和生长能力均明显降低,在HeLa细胞中过表达miR-7细胞凋亡增加。靶基因筛选结果表明,XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis protein)3’UTR区包含miR-7的潜在结合位点。荧光报告载体实验表明miR-7能够通过作用于XIAP基因的3’UTR区的特定位点对其表达进行负性调节。而在miR-7过表达的HeLa和C-33A细胞中,XIAP基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平都有明显下降。沉默HeLa和C-33A细胞中XIAP基因的表达后,细胞活性及增殖能力均明显受到抑制,在HeLa细胞中沉默XIAP细胞凋亡增加。[结论]miR-7能够通过靶定XIAP基因抑制宫颈癌细胞的增殖和促进细胞凋亡,起到抑癌基因的作用。XIAP能够促进宫颈癌细胞的增殖和抑制细胞凋亡,发挥癌基因的作用。阐明miR-7在宫颈癌细胞中的具体作用及其靶基因的研究有利于我们对宫颈癌的发生发展进行深入的理解,同时也为临床上宫颈癌的诊断和治疗研究提供新的方向。