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研究背景及目的:弥漫大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是最常见的一类非霍奇金淋巴瘤,在国内的发病率明显高于国外,其病因及发病机制至今仍不清楚。以利妥昔单抗(Rituximab)为代表的靶向治疗已取得了良好的疗效。但是,仍然不能克服肿瘤细胞形成的免疫耐受。随着对肿瘤发病机制研究的不断深入,我们逐渐认识到某些基因、蛋白的表达异常与免疫耐受密切相关。因此,探索和研究这些基因或是蛋白的表达对免疫系统的影响,针对性的的阻断免疫耐受形成的关键通路,是提高DLBCL利妥昔单抗治疗效果的重要方法。色氨酸代谢与免疫耐受之间的关系,是近年来的研究热点。吲哚胺2,3-双加氧酶(Indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)作为肝脏以外唯一可催化色氨酸进行分解代谢的限速酶,也备受关注。IDO在正常人体组织中表达为阴性或弱阳性,人类恶性肿瘤组织中IDO表达呈强阳性。其表达明显增高,可使肿瘤细胞逃避肿瘤相关的抗原介导的细胞毒性T细胞的攻击,从而使肿瘤产生免疫耐受。大量的体外实验和动物实验已经证明,通过抑制IDO,不仅可抑制肿瘤细胞的生长,还能增加肿瘤细胞对免疫效应细胞的敏感性,对基础化疗产生协同作用。本研究旨在,通过调节Raji细胞中IDO的表达,来观察对利妥昔细胞毒性作用的影响。方法:1、体外培养Raji细胞系和K562细胞系,采用Western blot方法检测IDO、CD20的表达情况,以及使用IDO抑制剂(氯喹、1-MT)或者诱导剂(IFN-γ)作用后,IDO蛋白表达的变化;2、氯喹、1-MT和IFN-γ作用Raji及K562细胞24h后作为靶细胞,新鲜人外周血中分离出的单个核细胞作为效应细胞,加入利妥昔,每个细胞系分为5组(E/T组、E/T+R组、E/T+R+CQ组、E/T+R+1-MT组、E/T+R+IFN-γ组),选择三个效靶比:1:1、5:1、10:1,进行杀伤试验,使用LDH释放法来测定杀伤活性。结果:1、Western blot结果显示:(1)Raji细胞IDO和CD20蛋白表达均呈阳性,K562细胞表达IDO蛋白,不表达CD20蛋白;(2)氯喹作用于Raji和K562细胞24h后,IDO的表达水平下降,并且随着氯喹浓度的升高,IDO蛋白的表达逐渐下降,在浓度为50μm/L时,IDO的表达水平最低(P<0.05);1-MT作用于Raji和K562细胞24h后,IDO的表达水平下降,并且随着1-MT浓度的升高,IDO蛋白的表达逐渐下降,在浓度为25μm/L时,IDO的表达水平最低(P<0.05);固定浓度IFN-γ作用于Raji和K562细胞24h后,IDO的表达水平明显升高(P<0.05)。2、LDH释放法测定细胞杀伤活性:(1)Raji细胞培养中加入利妥昔单抗与不加组比较,杀伤活性明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);(2)氯喹、1-MT抑制Raji细胞IDO蛋白的表达或者酶活性后,与单用利妥昔单抗组比较,在1:1、5:1、10:1的效靶比,杀伤活性都明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);(3)IFN-γ作用于Raji细胞24h升高IDO蛋白的表达后,与单用利妥昔单抗组比较,在5:1的效靶比时,杀伤活性降低,但是差异无统计学意义(P>0.05);(4)K562细胞中,加用利妥昔单抗或者使用氯喹、1-MT及IFN-γ调节细胞IDO蛋白的表达或者酶活性后,对细胞杀伤活性影响不大。结论:1、DLBCL细胞IDO高表达及活性增加是导致利妥昔抵抗的潜在分子机制之一;2、抑制DLBCL细胞的IDO表达和活性可增加利妥昔的抗肿瘤作用;3、IDO抑制剂联合利妥昔可能是治疗DLBCL中IDO介导的利妥昔抵抗的一个有效途径。