奶牛子宫内膜炎是危害畜牧业生产发展的主要产科疾病,每年在世界范围内造成巨大的直接损失和间接损失。迄今为止,对其研究已经有近百年的历史,但由于其病原不明确、病理学机制尚未阐述清楚等多方面的原因,导致此疾病的防控及治疗仍然没有有效的方法。因此,寻找快速有效的病原检查方法,探索相应的治疗措施,选择有针对性的治疗药物等措施,是对本病研究的关键。本研究通过对奶牛子宫内膜炎真菌病原的巢式PCR-DGGE检测方法的建立和临床诊断效果的研究,既为奶牛子宫内膜炎病原学的临床检查建立快速、准确、有效的技术手段,也为以后有针对性的药物研究提供了指导和理论帮助,为奶牛子宫内膜炎有效的防控及治疗提供科学依据。本论文分四个阶段完成,首先利用传统的方法对子宫内膜炎患牛子宫内的真菌进行分离鉴定,并以此菌建立检测方法；其次在实验室条件下,建立奶牛子宫内膜炎真菌病原的巢式PCR-DGGE检测方法,并对其检测限、重复性等指标进行检测；然后结合临床实际应用,进一步完善该检测方法,并与传统方法进行比较；最后有针对性地给药,观察治疗效果。主要试验和结果如下：1.以传统方法分离到的病原性真菌作为参考菌种,在实验室条件下建立方法。利用真菌固有的18S rDNA保守区域设计通用引物,确立靶基因进行分析。结果表明：巢式PCR-DGGE方法检测灵敏度高、特异性强,且具有良好的可重复性。与传统方法比较,快速准确。临床应用该方法检测真菌病原,比传统方法更为优越,分离鉴定到的致病性真菌更为全面,适合应用于奶牛子宫内膜炎真菌病原的检测。2.利用药物对此方法的诊断效果进行检验,结果显示：根据巢式PCR-DGGE分析方法给以药物治疗,针对性强。对于真菌性子宫内膜炎奶牛的治疗具有确实的效果,实验动物病情的转归十分明确,缩短了治疗时间,降低滥用抗生素的风险。3.研究中应用巢式PCR-DGGE分析方法对吉林市某奶牛场奶牛子宫内的主要致病性真菌进行了流行病学调查,结果发现：念珠球菌属的白色念珠球菌、热带念珠菌、土曲霉为主要致病菌。一年四季子宫内膜炎均有发生,在秋冬季节真菌性子宫内膜炎的发生比例最高。