酵母菌DNA聚合酶Pol eta催化核心跨8-oxoG损伤的动力学研究

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活性氧自由基可以损伤DNA碱基产生8-oxoG,导致G:C向A:T转换。为了更好的研究dNTP插入到8-oxoG对位的动力学机制,我们使用了消除C端C2H2序列模体对dNTP插入有潜在效应的酵母DNA聚合酶催化核心(Polηcore,残基1-513)进行核苷酸插入的稳态前动力学研究。动力学分析显示Polηcore偏好插入dCTP到8-oxoG的对位。Polηcore缺乏稳态前的快速相提示dCTP的插入慢于聚合酶从DNA上解离。通过8-oxoG的延伸产物是由LC/MS-MS确定的,显示57%的产物是对应正确(dCTP)的插入的和43%对应dATP的错误插入。与用单一dNTP相比,dNTP的混合物中有更多的dATP插入到8-oxoG对位。酵母DNA聚合酶Polηcore通过8-oxoG的动力学分析提供了酵母DNA Polη通过氧化损伤位点上突变机制的进一步解释。
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