siRNA-ERCC1对A549/DDP细胞的耐药逆转作用

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目的探讨ERCC1-siRNA靶向沉默切除修复交叉互补基因组1(excision repair cross-complementing group 1,ERCC1)对肺癌细胞株A549/DDP化疗敏感性的影响。方法设计并合成靶向人的ERCC1基因的小分子干扰RNA(RNAi);采用脂质体lipofectamine 2000转染入人肺癌细胞株A549/DDP,RT-PCR和Western Blot检测ERCC1干扰效果;MTT法分析各组细胞对DDP化疗敏感性的变化。结果1、RT-PCR检测ERCC1-siRNA干扰后各组细胞ERCC1 mRNA的表达,结果表明,转染48小时后,转染组mRNA相对表达量为0.39±0.11,与未转染组(0.82±0.26)相比,ERCC1 mRNA表达量有下调(P=0.002);与阴性对照组(0.90±0.17)相比,ERCC1mRNA表达量有所下调(P=0.000),差异有统计学意义;而阴性对照组与未转染组对比,两者无差异,无统计学意义(P=0.460)。2、Western-Blotting检测ERCC1-siRNA干扰后各组细胞ERCC1基因蛋白表达,结果表明,转染siRNA-ERCC1组蛋白相对表达量为0.65±0.15,与未转染组(1.16±0.44)相比,ERCC1基因蛋白相对表达量有所下调(P=0.025);与阴性对照组(1.17±0.40)相比,ERCC1基因蛋白相对表达量有所下调(P=0.024),差异有统计学意义;而阴性对照组与未转染组对比,两者无差异,无统计学意义(P=0.972)。3、MTT实验结果表明,ERCC1-siRNA转染后细胞增殖抑制率明显升高,IC50值明显下降(8.63±2.03)ug/ml,与阴性对照组(16.69±1.69)ug/mL和未转染组(16.71±2.33)ug/ml比较差异有统计学意义(P=0.000)。而阴性对照组与未转染组对比,两者无差异,无统计学意义(P=0.986)。结论利用RNA干扰技术能够抑制ERCC1基因的表达,增加肺癌A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,部分逆转耐药。
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