论文部分内容阅读
目的：建立银杏叶制剂的HPLC指纹图谱，对不同厂家银杏叶制剂指纹特征相比较；建立高效液相色谱法测定银杏叶制剂中4种黄酮类成分的含量，为银杏叶制剂的质量评价提供有效手段和依据。
方法：
1.银杏叶制剂指纹图谱研究
(1)提取：比较了不同提取方法、提取溶剂及提取时间的提取效果，选择提取成分较多，提取率较高的提取条件。
(2)色谱条件：选用合适的色谱柱，调整流动相的组成、配比、流速，调节柱温，选择最佳的色谱条件，使色谱图符合指纹图谱研究的要求。
(3)系统适用性试验：在已确定的色谱条件下，考察指纹图谱中参照物芦丁峰的分离度和理论板数。
(4)精密度试验：取同一份供试品溶液，重复进样6次，记录保留时间和峰面积，同时比较所得指纹图谱的相似度。
(5)重复性试验：取同一批银杏叶制剂6份，平行制备供试品溶液，分别进样，记录保留时间和峰面积，同时比较所得指纹图谱的相似度。
(6)稳定性试验：取同一份供试品溶液分别于0、2、4、6、8、24h进样，记录保留时间和峰面积，同时比较所得指纹图谱的相似度。
(7)指纹图谱的建立：分别取不同厂家的银杏叶制剂22批进行指纹图谱分析。
2.银杏叶制剂化学成分含量测定研究
(1)提取：比较了不同提取方法、提取溶剂及提取时间的提取效果，选择待测成分提取率较高的提取条件。
(2)色谱条件：选用合适的色谱柱，调整流动相的组成、配比、流速，使各待测成分色谱峰的分离度均符合测定的要求。
(3)标准曲线的制备：配制一系列浓度的混合对照品溶液，测定峰面积；以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线，经回归处理得各标准曲线方程。
(4)检测限试验：将混合对照品溶液逐步稀释，当信噪比S/N≥3时确定为检测限。
(5)精密度试验：取同一份样品溶液，重复进样6次，测定峰面积，计算仪器精密度；
(6)重复性试验：取同一样品，精密称取6份，制备溶液，进样测定。
(7)稳定性试验：取样品溶液分别于0、2、4、6、8、24h进样测定。
(8)回收率试验：取已知含量的银杏制剂6份，精密称定，分别精密加入一定量的对照品，制备供试品溶液，进样测定回收率。
(9)样品测定：在上述色谱条件下，测定不同厂家银杏叶制剂中各待测成分的含量。
结果：
1.银杏叶制剂指纹图谱研究
(1)提取：最佳提取条件为用75％甲醇超声提取30min。
(2)色谱条件：采用C18色谱柱；乙腈-0.05％磷酸为流动相进行梯度洗脱，流速为1mL·min-1，柱温为30"C，进样量为10μl。
(3)系统适用性试验：按芦丁峰计算理论板数约为4700，与其它色谱峰的分离度大于1.5。
(4)精密度试验：以芦丁峰为内参比峰，计算各主要色谱峰相对保留时间和占总峰面积5％以上色谱峰的相对峰面积，其RSD分别为0.08％～0.89％和1.1％～2.0％，同时所得指纹图谱相似度均高于0.97，符合指纹图谱测定要求，精密度良好。
(5)重复性试验：各主要色谱峰相对保留时间和占总峰面积5％以上色谱峰的相对峰面积均无明显变化，其RSD分别为0.10％～0.81％和1.0％～1.5％，同时所得指纹图谱相似度均高于0.98，符合指纹图谱测定要求，重复性良好。
(6)稳定性试验：各主要色谱峰相对保留时间及占总峰面积5％以上色谱峰的相对峰面积均无明显变化，其RSD分别为0.11％～1.1％和1.2％～1.8％，同时所得指纹图谱相似度均高于0.98，符合指纹图谱测定要求，稳定性良好。
(7)指纹图谱的建立：得到不同来源银杏叶制剂的指纹图谱。
2.银杏叶制剂化学成分含量测定
(1)提取：同“指纹图谱”。
(2)色谱条件：同“指纹图谱”。
(3)标准曲线的制备：各待测组分线性关系良好，r＞0.99。
(4)检测限试验：1-4的检测限分别为0.015、0.011、0.023、0.017μg·ml-1。
(5)精密度试验：方法的精密度良好，其仪器RSD小于3％。
(6)重复性试验：6份样品的平均含量分别为2.194、0.1788、0.1358、0.1056mg/片，RSD分别为1.1％、1.2％、2.4％、2.2％，方法的重复性好。
(7)稳定性试验：供试品溶液在24h内基本稳定，1-4的RSD分别为0.77％、1.0％、1.7％、1.8％。
(8)回收率试验：平均回收率在97％～99％之间，RSD均小于3％，方法的准确度高。
(9)依据上述色谱条件进行分析，由标准曲线计算得到各个样品中各待测组分的含量。
结论：本文建立了不同厂家银杏叶制剂的HPLC-UV指纹图谱，并进行了比较，利用相似度软件对不同厂家银杏叶制剂间的差异进行了研究；首次建立了高效液相色谱法同时测定银杏叶制剂中4种黄酮类成分的含量。方法简便快速、结果准确可靠，专属性强，精密度和稳定性良好，可用于银杏叶制剂的质量控制。