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本文利用分光光度法研究了生物大分子与光谱探针偶氮氯膦Ⅲ、结晶紫和二甲酚橙的相互作用及其动力学反应机理,并建立了动力学法测定生物大分子的新体系。研究了反应条件、共存离子干扰、动力学参数等。并借助荧光光度法、红外光谱法等光谱分析证明了该反应机理。具体内容如下:
第1章综述了近年来蛋白质分析研究的方法和成果。
第2章在0.01 mol/L硫酸介质及沸水浴条件下,研究了蛋白质阻抑KIO<,4>氧化偶氮氯瞵Ⅲ褪色的反应,通过测量催化和阻抑体系中偶氮氯膦Ⅲ在550 nm处的吸光度,计算ΔA,建立了测定痕量蛋白质的新方法,蛋白质的浓度在0~6 mg/L范围与催化反应速度呈良好的线性关系,方法的检出限为2.9×10<-13>mg/L。对实际样品进行了测定,回收率为96~109%。研究了动力学反应机理,确定为假一级动力学行为,活化能增加了67.77 KJ/mol。
第3章利用动力学法研究了碱性条件下结晶紫与蛋白质之间的相互作用。实时测量了反应的进程,确定了蛋白质与结晶紫的结合位点数(n),反应动力学参数(AE),研究了蛋白质存在的下结晶紫醇化反应的机理。确定蛋白质与结晶紫存在两种作用位点,蛋白质对结晶紫的醇化反应在不同时期分别起催化和阻抑的作用。并提出了测定蛋白质的动力学吸光光度法。人血清蛋白质浓度在0.005~11 mg/L,牛血清白蛋白浓度在0.005~8 mg/L范围内与ΔA呈线性关系,检出限均为2.1×10<-13>mg/L。
第4章在酸性溶液中,研究了过氧化氢氧化结晶紫(CV)褪色,DNA对该氧化褪色反应起阻抑作用(反催化作用),采用流水冷却的办法终止反应,据此建立了一种测定微量DNA的动力学分析新方法。DNA的含量在0~1.0 mg/L范围内与抑制褪色的程度呈线性关系,检测限为0.004 mg/L。优化了实验的条件,初步提出了动力学反应测定微量DNA的机理。
第5章本章研究了在稀硫酸介质中,蛋白质灵敏地阻抑溴酸钾氧化二甲酚橙的褪色反应。研究了反应条件,及阻抑反应的机理,建立了动力学光度法测定痕量蛋白质的新方法。蛋白质的含量在0.002-2.0 mg/L范围内与突变时间呈线性关系,检出限为1.67×10<-13> mg/L,应用于实际样品分析结果满意。