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嗜肺军团菌在自然界中广泛存在,通过向宿主细胞中分泌毒性效应蛋白,改变宿主细胞功能,抑制宿主细胞的内吞途径来实现自身的存活和复制。嗜肺军团菌能够感染肺部,造成军团菌肺炎,对人类的健康构成极大威胁。嗜肺军团菌在宿主细胞中的复制依赖于其Dot/Icm分泌系统,该分泌系统可将数百种毒性效应因子转移到宿主细胞中。本文研究的是其中一种毒性效应蛋白SdeA所介导的特殊型泛素化的分子机制,重点开展的是该泛素化过程所涉及的蛋白质的结构生物学研究,及SdeA与分泌系统组成蛋白DotL、IcmS及IcmW等形成的复合物的结构生物学研究。 本论文成功构建了不同长度的SdeA及不同标签的泛素(Ub)的重组克隆,并将其在大肠杆菌中成功表达,提纯蛋白质的纯度和均一性满足结晶要求。通过共结晶实验,成功获得了SdeA与Ub复合物的晶体,该晶体经过X射线衍射后收到了分辨率为3.1(A)的数据,进而解析了效应蛋白SdeA231-1190aa与Ub复合物的三维结构。晶体结构在分子水平上展示了两者的结合方式及相互作用细节,为SdeA介导的特殊型泛素化奠定了重要的结构基础。 本论文的另一部分是关于效应蛋白SdeA与IcmS/IcmW/DotL复合物的纯化与结晶研究。我们首先构建了IcmS、IcmW、DotL及IcmS+IcmW的重组克隆,并成功在大肠杆菌中表达,获得了IcmS/IcmW二元复合物、IcmS/IcmW/DotL三元复合物及SdeA/IcmS/IcmW/DotL四元复合物,经过大量的结晶条件摸索,目前已成功获得了四元复合物的蛋白晶体,数据收集正在进行中。