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乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。近年来,我国乳腺癌的发病率逐年上升,且呈年轻化趋势。乳腺癌已成为我国女性健康的重大威胁。作为其主要治疗手段之一的联合化疗虽有较高的治愈率,但常引起骨髓抑制、肝肾功能损害等不良反应,使化疗被迫中断,原发或继发耐药亦往往导致化疗失败。因此,寻求高效低毒的抗肿瘤药物是目前肿瘤治疗的主要研究内容之一。近半个世纪以来,运用中药治疗恶性肿瘤,逐渐被广大学者和患者接受,成为恶性肿瘤综合治疗常用的有效手段之一。临床研究证明,中药不仅对化、放疗起减毒、增敏、增效的作用,而且有预防肿瘤的复发转移及抗肿瘤作用,中药以无明显毒副作用、药源广泛、价格低廉等特点在恶性肿瘤治疗中显示其独特的优势。乙酰氧基胡椒酚乙酸酯（1’-acetoxychavicol acetates,ACA）是一种从姜科植物,如南姜（Languas galangal）和大高良姜（Alpinia galangal Swartz）的根茎中分离得到的有效成分,在东南亚地区高良姜的根茎常用来作为辛辣调味品和胃药。早期研究发现ACA体外能够阻止肿瘤促进因子诱导的EB病毒激活,还能够抑制化学诱导的肿瘤形成,并有效阻止Ehrlich腹水瘤细胞的生长。近来的研究证实ACA在体内、外可通过诱导凋亡显著地抑制人髓系白血病细胞、多发性骨髓瘤细胞的生长。ACA用于乳腺癌的研究国外仅有一例,但是未对其作用机制进行探讨。关于ACA抗肿瘤的分子机制人们还不甚清楚,研究发现其作用机制复杂,对于不同类型的细胞作用途径不同,因此探讨其新的抗瘤谱及作用机制是十分必要的。本实验以体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,观察ACA对MCF-7细胞增殖及凋亡的影响,并运用细胞生物学、分子生物学的方法观察ACA对Bcl-2、Bax基因表达的影响,探讨其可能的分子机制,为进一步体内研究和临床应用提供实验依据。目的观察不同浓度ACA对MCF-7细胞的生长抑制作用和诱导凋亡作用以及对Bcl-2、Bax基因表达的影响,初步探讨其诱导凋亡的机制。方法1 MTT法检测ACA对MCF-7细胞的生长抑制作用实验分两组:①药物组:加入不同浓度的ACA;②对照组:加入等体积含等容积DMSO的培养液。每个浓度设8个平行孔,ACA作用于MCF-7细胞24h后,测定吸光度（A）值,计算细胞的生长抑制率和药物的IC50。2应用倒置显微镜、HE染色法观察ACA对MCF-7细胞形态学的影响;流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率的变化;免疫细胞化学法检测ACA对MCF-7细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax蛋白表达的影响;RT-PCR方法检测Bcl-2和Bax mRNA表达的变化。结果1 ACA对MCF-7细胞的增殖抑制作用ACA对MCF-7细胞有显著的增殖抑制作用,10μmol/L组、50μmol/L组、100μmol/L组、150μmol/L组、200μmol/L组,细胞生长抑制率分别为12.70%、13.27%、26.82%、66.21%、83.27%,呈明显的剂量依赖性,相关系数r=0.938,P＜0.001。各药物组与对照组A值的差异均有统计学意义,P＜0.001。其24h的IC50为（108.57±5.85）μmol/L。2 ACA诱导MCF-7细胞凋亡的作用2.1 ACA作用后MCF-7细胞形态学变化ACA作用后,与对照组相比,ACA终浓度为50μmol/L时,MCF-7细胞形态未出现明显的变化;而终浓度为100、150μmol/L时,MCF-7细胞出现凋亡的形态学变化:细胞皱缩,表面粗糙,胞质浓集、核浓缩致密。细胞与相邻细胞分离,向上卷起,最终呈悬浮状态,且随药物浓度增大,细胞悬浮增多。2.2 ACA对MCF-7细胞周期及凋亡率的影响ACA对MCF-7细胞在G0/G1、S、G2/M期的细胞百分数无明显影响,终浓度为150μmol/L时,可见明显的亚二倍体峰,其凋亡率为（11.83±0.58）%。2.3 ACA对MCF-7细胞Bcl-2和Bax mRNA表达的影响经ACA干预后,随着其浓度的升高,Bcl-2的mRNA表达逐渐下降,而Bax的mRNA表达逐渐升高,与对照组相比,均有显著性差异。2.4 ACA对MCF-7细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响经ACA干预后,随着其浓度的升高,细胞内Bcl-2蛋白表达逐渐下降,而Bax蛋白表达逐渐升高,与对照组相比,均有显著性差异。结论1 ACA对MCF-7细胞有显著的增殖抑制作用,其抑制作用呈明显的剂量依赖性。2 ACA在体外能诱导MCF-7细胞凋亡。3 ACA诱导的MCF-7细胞凋亡可能与下调Bcl-2基因表达和上调Bax基因表达有关。