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余甘(Phyllanthus emblica L.)是大戟科叶下珠属植物,是世界卫生组织指定在世界范围内推广种植的3种保健植物之一,2002年被我国卫生部确定为药食两用植物,是我国的传统民族用药。余甘多糖是余甘的主要活性成分,具有抗肿瘤和抗氧化生物活性。目前对余甘多糖的研究主要侧重于精多糖药理活性探索,对其活性级分及结构研究较少,且不够深入。本文以余甘主栽品种“粉甘”果实为研究对象,对余甘多糖的提取技术、分离纯化方法、结构信息以及多糖抗氧化活性进行了系统研究,研究结果如下:从余甘中提取出粗多糖,其糖含量为31.13%;粗多糖经冻融分级、脱色素、除蛋白、透析和凝胶柱层析等初步分级纯化后,得白色丝状余甘精制多糖EPS,多糖收率10.33%;EPS的化学组成为:中性糖61.67%,糖醛酸26.04%,蛋白质1.98%,中性糖由Gal、Rha、Ara、Glc、Xyl和少量Man组成,糖醛酸为GalA。研究了余甘多糖的超声波强化提取和微波辅助萃取工艺。超声波提取最佳工艺参数:超声波提取温度80℃、超声波时间70 min、超声波功率475 W、料液比1:20;微波前处理-热水浸提法最佳工艺参数:微波前处理功率480W,微波处理时间60s,热水浸提温度90℃,浸提时间4h。对水提余甘精多糖的分级纯化方法和化学组成进行了研究。EPS经DEAE-Sepharose CL-6B柱层析分级后得到2个多糖级分EPS1和EPS2;EPS1为中性多糖,经HPGFC分级后得到2个多糖级分EPS1-1和EPS1-2;EPS2为分子量均一的酸性多糖,;EPS1-1、EPS1-2和EPS2分别占总洗脱量的3.39%、19.60%和77.01%,总回收率92.32%。EPS1-1是一种中性多糖,相对分子质量约为123 KDa,纯度98.53%,总糖95.09%,主要由Gal、Glc组成;EPS1-2总糖含量96.66%,纯度98.91%,分子量约为15 KDa,是一种中性多糖,主要由Gal、Glc和Xyl组成;IR光谱显示EPS1-1和EPS1-2是β构型的吡喃醛糖。EPS2是一种酸性多糖,含有79.01%的半乳糖醛酸,总糖含量97.53%,相对分子质量约为140 KDa,纯度98.96%,主要由GalA、Gal和Rha组成,还有少量的Ara;单糖组成结合IR图谱确定EPS2是一种果胶多糖,多糖分子以α-糖苷键为主,并含有一定量的β-糖苷键。应用NMR、GC-MS、FT-IR、GC、HPLC等仪器分析技术,配合部分酸水解、甲基化分析等经典化学方法研究了余甘多糖EPS1-2和EPS2的化学结构。EPS1-2的结构特征为:糖残基构型主要是1, 4-,1, 6-β-D-Galp、T-,1, 4-,1, 3, 6-β-D-Glcp以及1, 3, 6-,1, 2-β-D-Manp;主链由Galp和Glcp连接形成半乳葡聚糖,(1→)-β-D-Glcp为主链的非还原性末端残基,主链每五个糖残基中有一个分支;由1, 6-β-D-Glcp通过O-3位与1, 3, 6-,1, 2-β-D-Manp等中性糖侧链相连;Manp残基处于支链位置,1, 3, 6-Manp处于支链的核心区域。EPS1-2主要由β-构型构成,含有少量α-构型。部分糖残基被乙酰基取代。EPS1-2重复结构单位可能为:EPS2一种典型的果胶多糖,主链由1, 4-D-GalpA线性连接形成半乳糖醛酸聚糖,由1, 4-D-GalpA通过O-4位与1, 2-、1, 2, 4-L-Rhap的O-1位交替连接形成含有较多分支的鼠李糖半乳糖醛酸聚糖。半乳糖醛酸聚糖链部分羧基被甲酯化,部分O-2或O-3位被乙酰基取代。T-、1, 6-、1, 3, 6-α-Galp和T-、1, 5-α-Araf聚合形成的阿拉伯半乳聚糖以及半乳聚糖是EPS2侧链的主要组成,通过Rhap残基的O-4位与主链相连。T-α-GalpA、T-α-L-Araf和T-β-Galp位于非还原性末端。EPS2可能的一种分子结构为:通过检测EPS、EPS1、EPS1-2和EPS2对羟基自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基的清除能力以及抗脂质过氧化和还原能力,对余甘多糖的体外抗氧化活性进行了研究,并与阳性对照BHT进行比较。结果表明,EPS1-2和EPS2均表现出很强的抗氧化活性,各级分多糖的抗氧化活性大小为EPS2 > EPS1-2 > EPS1 > EPS,均多糖的活性大于杂多糖;EPS2的还原能力强于BHT。酸性多聚糖EPS2的抗氧化活性高于中性多聚糖EPS1-2和EPS1,这与酸性多糖含有较多的带负电荷的糖醛酸有关;EPS1-2的抗氧化活性强于EPS1,表明多糖的抗氧化活性与分子量大小有关;多糖的糖单元类型、糖苷键构型、取代基、空间结构等结构因素也是影响多糖抗氧化活性的主要因素。