目的 肾纤维化是肾脏多种损伤如：辐射、创伤、缺血及肾移植术后慢性排异反应等修复的共同转归，由于肾纤维化的发病机理并未完全阐明，因而临床对其预防及治疗缺乏有效方法。近年来，相关的细胞因子越来越引起人们的重视。我们采用⁶⁰Coγ射线照射Wistar雄性大鼠建立肾纤维化的动物模型，结合临床同种异体肾脏移植术后的慢性排异反应所致的肾纤维化标本，以多种分子生物学方法进行检测，探讨其发生及发展的分子病理学机制，以期为肾纤维化的临床预防及治疗提供有益的线索。方法 130只健康的成年Wistar雄性大鼠随机分为对照组、10Gy、30Gy、50Gy以及60Gy组，以⁶⁰Coγ射线对大鼠双肾区进行单次照射，于照射后0.5、1、2、6、9及12共6个时相点取材，检测大鼠血尿素氮（BUN）及肌酐（Cr）含量，对大鼠肾组织进行常规病理观察，并分别以免疫组织化学的方法对α-平滑肌动蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）及纤溶酶原激活物抑制因子-1（PAI-1）的表达进行检测，以原位杂交的方法检测TGF-β₁及PAI-1mRNA的表达水平。通过荧光素酶在肾组织的活性表达的检测，探讨重组腺病毒载体质粒在纤维化肾组织中的感染情况。同时，对人类同种异体肾脏移植术后肾纤维化组织TGF-β₁及PAI-1mRNA的表达以原位杂交的方法进行检测。结果 单次照射60Cy及50Cy组大鼠分别于照射后1-2个月内死亡，30Gy及10Cy组在照射后2月内死亡率分别为60.9％和8.0％；照射后3-12个月，对照组无动物死亡。可见照射剂量越大，死亡率越高，死亡时间越早。 光镜下病理形态学观察发现，照射初期大鼠肾组织为急性炎症改变。单次照射50伪及60Gy组大鼠肾脏在照射后1个月均出现肾小球及肾小管扩张、浊肿、变性、坏死及萎缩，肾结构紊乱，各级毛细血管扩张，血栓形成，充血甚直出血，血管内嗜酸性物质增多，间质水肿，淋巴细胞和巨噬细胞浸润，肾小球及肾小管径变小，纤维成份增加。单次照射30衍组大鼠肾脏在照射后一年内逐渐出现了肾纤维病变，呈进行性发展，大致可分为四个阶段，急性放射性肾炎期:多发生在照射后一个月内的大鼠肾脏组织，肾脏充血肿胀，体积增大，部分肾脏呈出血样改变;光镜下观察肾小球及肾小管肿胀，结构紊乱，毛细血管充血，嗜酸性物质增多，局部有血栓形成或出血;肉芽生成期:毛细血管扩张，嗜酸性物质增多，肾小管壁及基底膜增厚，胶原及弹力纤维增多，网状纤维呈多层网状分布，并可见大量成纤维细胞;纤维增生期:肾小管及系膜重度增厚，管腔变小，肾小球一肾小管交界处即球一管颈部狭窄，并可见局灶性、片状纤维化，胶原纤维进一步增多，网状纤维呈支架样分布;肾小球硬化期:部分肾单位被纤维组织取代，管腔极度狭窄或消失，细胞数目减少，弹力及网状纤维少见。 分子生物学检测发现，照射组a一SMA、FN、TGF一p，及PAI一1均于肾脏的不同部位有较高的阳性表达，且其阳性表达率各组间差异显著，并与照射后时间密切相关。 以原位分子杂交技术检测人类同种异体肾脏移植术后的慢性排异反应所致的肾纤维化标本中的TGF一p，及PAI一1 mRNA表达水平发现，纤维化的肾组织均有较强TGF一p，及PAI一1 mRNA表达，并与纤维化的程度相关，无纤维化的肾组织不表达或低表达，表明TGF一p，及PAI一l亦参与了移植肾纤维化的形成。 荧光素酶实验显示，重组的腺病毒穿梭质粒在照射后的大鼠肾组织中有较高的活性表达，提示重组缺陷型腺病毒有可能成为肾纤维化的一个有效的治疗手段。结论 1.以60Co，射线30卿单次肾区照射Wistar大鼠，可以复制出大鼠肾纤维化动物模型，并根据病变程度明确照射剂量与效应关系。局部单次照射大鼠出现明显的肾功能下降，并与照射后时间及照射剂量相关。血Hct降低可能与成纤维细胞改变了血红蛋白的阂值及肾脏EPo的合成减少有关。 2.天狼猩红染色偏振光显微镜观察是区别I型及111型胶原纤维良好的方法，并有可能成为判断肾纤维化不同程度、阶段以及预后的指标之一。 3.TGF一p、及PAI一1是参与肾纤维化调控的主要细胞因子，该两种细胞因子的表达呈明显的时空关联及交叠现象。 4.细胞因子TGF一pl及PAI一1均参与了人类同种异体肾脏移植术后肾纤维化的发生及发展过程。干预该两种细胞因子在肾脏移植患者体内的表达有可能成为预防及治疗肾纤维化发生的新途径。 5.重组缺陷型腺病毒Ad 5 pCA14一Luc体内基因治疗后，于2天和6天所有6只受照射大鼠均检测到了荧光素酶活性表达。说明应用重组缺陷型腺病毒进行体内基因治疗有望成为治疗肾脏纤维化的有效途径