[背景]1978年,Stocker和Ishak对美军病理研究所(AFIP)收集到的一组31例具有肉瘤样特征,并伴细胞质内PAS染色阳性小体的肝脏肿瘤的研究发现,51.6%的患者为6-10岁儿童,他们首次将其命名为肝脏未分化(胚胎性)肉瘤(undifferentiated (embryonal) sarcoma, UES),现被世界卫生组织(WHO)采用,也曾有人称为肝脏恶性间叶瘤。UES是一种少见的,仅发生于肝脏的恶性间叶源性肿瘤,免疫组化和电镜结果支持UES是间叶细胞起源,有人推测可能来自间叶性错构瘤恶变。至今全世界中英文文献检索仅报道约150例UES。UES恶性程度高,预后差,AFIP报道的UES患者的中位生存时间小于1年。到目前为止,UES多以个例临床报道为主,还极少有单中心大例数UES组织发生和分子变异特点研究的报道。[目的](1)探讨单中心最大系列手术切除肝脏UES的临床和病理学特点,为临床和病理学正确诊断UES提供组织病理学依据；(2)采用基因组微卫星杂合性缺失(LOH)分析策略,探讨UES的分子克隆起源特点,为了解UES的组织发生和分子分型提供分子病理学依据；(3)采用微小RNA(miRNAs)表达谱分析策略,筛选UES组织中高度差异表达miRNAs,通过生物信息学的方法预测其作用的靶基因,进而为开展UES靶基因功能通路和分子靶点的研究提供新的思路。[方法](1)选取2000年1月～2011年12月期间,在第二军医大学东方肝胆外科医院行手术切除且临床资料完整的43例UES患者,患者的性别、年龄、临床症状等临床参数来源于原始病历记录；UES的病理诊断按照WHO制定的标准,调阅全部UES病例的原始住院病历、病理报告和组织切片,对肿瘤大小、组织结构、细胞类型及免疫组化结果等进行复片和核对。我们按照UES的组织学特点,将UES分成六个亚型： Ⅰ型：梭形细胞型、Ⅱ型：小细胞型、Ⅲ型：疏松水肿型、Ⅳ型：上皮样细胞型、Ⅴ型：间变细胞型、Ⅵ型：混合细胞型。通过电话和信件等方式随访患者的术后生存情况,随访时间截至到2011年12月30日。(2)根据我科实验室建立的多结节性肝细胞癌和复发性肝细胞癌克隆起源特征微卫星LOH检测技术流程,选择15个基因组微卫星高频LOH位点。又根据文献报道,p53基因信号通路可能参与UES的发病机制,我们选取了该通路相关基因微卫星D12S1972(CDK4)和D9S974(CDKN2A)2个微卫星位点。此外,根据前期临床资料统计,我们发现UES在男性的发病率较高,为此,我们又选取了与雄激素受体(AR)基因相关的微卫星DXS9736,共计18个微卫星LOH检测位点。以手术切除的18例含两种成份且比例相当的UES为微卫星LOH研究对象,通过显微切割技术分别获取UES瘤组织和瘤旁肝组织,经DNA抽提和微卫星PCR-SSCP方法检测,按照文献共识,分别以微卫星发生LOH差异位点的比例<30%和≥30%作为肿瘤单克隆(UO)和多克隆(MO)起源模式的诊断标准,分析不同组织学类型UES在各微卫星LOH位点的分布和发生频率上的差异特点,同时,分析不同克隆起源的UES与临床病理学特点及手术预后等参数的相关性。(3)提取8对UES石蜡包埋组织总RNA(UES瘤组织和瘤旁组织),用miRNAs微阵列(包含1088个miRNAs)与总RNA杂交,使用AgilentG2655AA进行芯片扫描,Feature Extraction软件读取数据,采用GeneSpring软件进行差异分析。在2组样本中筛选出比正常组织表达大于2倍或小于2倍差异表达的miRNAs,采用靶基因预测数据库进行作用靶基因的预测和初步功能分析。[结果](1)临床病理学特点分析显示：本组UES以中青年男性多见,平均年龄35±22.49岁,<14岁和≥15岁的UES患者分别占32.6%(14／43)和67.4%(29／43),且发病率呈逐年上升趋势。临床主要表现为发热、右上腹不适、疼痛、及腹部包块；血清学生化检查以碱性磷酸酶、谷丙转氨酶和谷草转氨酶升高多见,影像学检查常出现大小不等囊状影或不规则无回声区。在三个年龄段中,14岁以内的UES患者,男女发病比例为1：1,临床常以腹痛和腹部包块为首发症状,无乙肝病毒(HBV)感染史；而在15～49岁和≥50岁的UES患者中,男女发病比例分别为11：1和14：3,以男性多见,临床症状不典型,成年男女UES患者均常伴有HBV感染史,分别为50%(6／12)和41.18%(7／17)。在UES的六个病理亚型中,梭形细胞型(Ⅰ型)预后最好(中位生存时间为15±4.2月),上皮样细胞型(Ⅳ型)预后最差(中位生存时间为3.0±1.0月)(P=0.018)。(2)微卫星LOH位点检测结果显示：MO型和UO型UES之间存在微卫星LOH位点差异,多种瘤细胞成份的UES仍以UO型为主,占61.1%,MO型UES占38.9%。在所检测的微卫星位点中,D1S507、D4S402、D8S277和DXS97364个位点上存在不同LOH模式的比例均超过30%,其中D8S277达到42.86%。UES克隆起源方式与患者的年龄和性别有关：MO型UES患者以<14岁的男性为主,UO型UES患者以≥15岁的女性为主(P=0.040,P=0.046)；MO型UES患者的术后中位无病生存期为18.0±2.6个月,明显优于UO型UES患者的11.0±±3.1个月(P＝0.019)。(3) miRNAs基因芯片检测结果显示：共有121个(?)niRNAs在UES组织中出现差异表达,其中32个miRNAs表达下调,89个miRNAs表达上调。挑选UES中下调最为显著的miR-122、miR-192和miR-194作为靶基因预测对象,通过生物信息网络平台预测出miR-122、miR-192和miR-194的共同作用靶基因是NFAT5(参与Fyn,PKA,ATM和P13K信号通路)和DYRK1A(调控CREB、STAT3、Gli等多种细胞内信号转导通路的关键蛋白激酶)。[结论](1)我国UES患者的HBV感染率达到30.2%,总体发病年龄较国外UES患者要晚5-10岁左右,提示我国UES好发于中青年男性,HBV感染可能是UES重要的病因学因素之一；微卫星LOH检测结果显示,雄激素受体的LOH频率达到36.4%,提示UES的发生还可能与雄激素代谢紊乱有关。(2)UES的病理亚型、微卫星变异特点、克隆起源方式与手术预后相关。梭形细胞型UES患者的预后最好,上皮样细胞型UES患者的预后最差；MO型UES患者的手术预后明显优于UO型UES患者,而青少年UES患者多为MO型,中老年患者多为UO型,青少年UES患者术后无病生存时间优于老年患者,表明对UES精细的病理分型和微卫星LOH分子分型,可为临床判断预后提供有价值的参考依据。(3)UES的组织发生以UO起源为主。为此,我们有理由推测,UES有可能来源于肝组织内多潜能肿瘤干细胞。而在MO型UES中,D1S507、D4S402、D8S277和DXS97364个位点的LOH发生频率最高,有可能作为鉴别MO型和UO型UES的分子病理学标志物；同时,这四个位点邻近的基因分别为IBD7、USP53、DBA2和AR,为进一步研究UES发病机制中的基因通路提供了重要线索,而青少年和中老年UES的发病机制可能存在差异。(4)UES存在特异的miRNAs差异表达谱,其中miR-122、miR-192和miR-194三种miRNAs显著下调,有可能作为UES新型肿瘤分子标志物,而对共同作用靶基因NFAT5和DYRKIA的深入研究,有望进一步了解UES靶基因的功能调控机制,为将来靶基因治疗研究提供新的思路。