七鳃鳗g型溶菌酶和含硒谷胱甘肽过氧化物酶2分子克隆、组织表达及生物活性研究

来源 :辽宁师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lhj123
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溶菌酶是先天免疫系统中对抗细菌病原体感染的一种关键蛋白。在本研究中,我们分析了七鳃鳗g型溶菌酶的分子特征及其在各组织中的表达,并且对在大肠杆菌中表达的重组蛋白的抗菌活性进行了测定。从七鳃鳗中克隆的g型溶菌酶cDNA为701 bp,ORF区为555 bp。实时定量PCR分析表明七鳃鳗g型溶菌酶在各组织中广泛表达,其中在肠中表达量最高。脂多糖(LPS)体内刺激七鳃鳗后发现溶菌酶在口腔腺和头肾表达量显著升高。以溶壁微球菌为底物检测重组g型溶菌酶的活性,结果表明其最适pH为7.5,最适温度为35℃。扫描电镜分析表明重组酶能够使溶壁微球菌破裂。以上结果均表明g型溶菌酶在七鳃鳗的先天免疫系统防御病菌感染中起到重要作用。谷胱甘肽过氧化酶2(GPx2),是生物体内重要的一类抗氧化酶,能够通过酶解过氧化氢阻断活性氧(ROS)的有害作用。本研究从七鳃鳗的血液cDNA文库中克隆了GPx2 c DNA全长和基因组DNA序列。序列分析表明,其cDNA全长为868 bp,包括53bp 5’UTR区、251bp 3’UTR区和564 bp开放阅读框,编码由187个氨基酸组成的多肽。基因组DNA序列揭示了基因组特征含有2个外显子和1个内含子结构。系统发育分析表明,七鳃鳗GPx2(LjGPx2)与其它的GPx2具有很高的同源性。利用实时定量PCR检测到GPx2基因在七鳃鳗各组织中广泛表达,其中在口腔腺、心脏、卵、生殖腺中表达量较高。此外,用脂多糖(LPS)体内刺激七鳃鳗后发现,LjGPx2 mRNA在生殖腺中表达量显著升高。本研究为探讨GPx2在七鳃鳗的免疫应答中的作用提供了理论依据。
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