产志贺毒素多重耐药大肠杆菌噬菌体的分离、生物学特性及全基因组分析

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产志贺毒素大肠埃希氏菌(STEC)是一类常见的肠道病原菌,通常会引发仔猪下痢并且传染性非常强,在仔猪幼小阶段会出现较高的死亡率,会给养猪业带来经济损失。由于预防此类疾病的动保产品成本相对较高,同时使用抗生素类药物所带来问题越来越引起注意,为此,寻找新的方式来解决细菌耐药的问题刻不容缓。噬菌体主要是侵入宿主菌通过裂解酶的作用杀灭细菌,噬菌体在自然环境中可以检测到并可以快速杀灭目标细菌,对其他的菌群影响较小。在感染细菌后,裂解性噬菌体会借助宿主体内的营养物质,完成子代噬菌体的扩增释放,并同时裂解宿主菌。噬菌体因其天然杀菌的特性,具有抗生素替代品和生物消毒剂研究开发的潜力。本研究以广西某猪场分离得到2株产志贺毒素且多重耐药的大肠杆菌GXEC007和GXEC010为宿主菌,分离纯化得到能高效裂解这2株大肠杆菌的噬菌体,分别命名为vB_EcoM_BP7和vB_EcoM_BP10。然后通过透射电镜观察、最佳感染复数测定、一步生长曲线绘制、评估热敏感性与酸碱度稳定性、杀菌试验及全基因组测序等方法分析这两株噬菌体的生物学特性与基因组特征。研究结果显示,两株噬菌体噬菌斑均呈清晰透明,边缘光滑整齐。vB_EcoM_BP7、vB_EcoM_BP10噬菌体的最佳感染复数分别为0.001和1。一步生长曲线结果显示,vB_EcoM_BP7感染宿主菌潜伏期为5 min,爆发期为70 min,爆发量为145 PFU/cell;vB_EcoM_BP10感染宿主菌潜伏期为5 min,爆发期为60 min,爆发量为51 PFU/cell。vB_EcoM_BP7与vB_EcoM_BP10可耐受温度范围相同为30-60℃,vB_EcoM_BP7能够在p H6-9的环境中维持稳定性,vB_EcoM_BP10则在p H为5-8的环境中能维持稳定性。噬菌体杀菌试验结果显示,感染复数(MOI)=1时噬菌体vB_EcoM_BP10具有良好的杀菌效果,而噬菌体vB_EcoM_BP7感染复数(MOI)=0.001时杀菌效果最显著。噬菌体vB_EcoM_BP10基因全基因组测序结果表明,它的基因组总片段长度为52 288 bp,GC含量为44.16%,含有72个ORF阅读框。GO功能注释表明,可参与小分子代谢、细胞氮化合物代谢等生物学过程,并具备核苷酸转移酶活性、离子结合、DNA结合等分子功能。进化树分析结果显示,与Escherichia phage ST32、Enterobacteria phage phi EcoM-GJ1的亲缘关系较近。综上所述,噬菌体vB_EcoM_BP7和vB_EcoM_BP10噬菌体都具有清晰的宿主,良好的热稳定性和酸碱稳定性,能为有效防控畜牧生产中产志贺毒素多重耐药大肠杆菌感染奠定一定的理论基础。
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