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研究背景肺癌是严重危害人类健康的一种常见肿瘤,发病率和死亡率呈现逐年上升的趋势。肺癌发现一般较晚,治疗效果不理想。随着医学的发展,治疗肺癌的方法逐渐增多,近年的主要发展方向是综合治疗、靶向治疗及个体化治疗。虽然人们强调综合治疗,临床方面已经积累了一定经验,但基础方面研究明显滞后,影响了临床综合治疗的发展。热疗作为一种物理治疗手段,不但可以抗肿瘤、缓解症状,与其他治疗手段联合还可以起到增敏作用。非小细胞肺癌(nonsmall-cell lung cancer, NSCLC)是肺癌最常见的类型,顺铂(cisplatin, DDP)和多西他赛(docetaxel, TXT)是治疗NSCLC的药物,沙培林(sapylin)是国产的注射用A群链球菌,为一种免疫制剂,不但可以调动机体抗肿瘤免疫力,而且对肿瘤细胞有直接杀伤作用。热疗、化疗和免疫治疗相结合的综合治疗方法虽然在临床有所应用,但应用的具体方法并不规范,治疗效果也还不够理想,因此需要进行基础和临床方面的实验,寻找更完善的肿瘤综合治疗方法。目的以人肺腺癌A549细胞为研究对象,分两个时间点(24h和48h)观察不同的温度与不同浓度的DDP、TXT和沙培林单独、两两联合、四种因素共同作用对细胞株的影响,探讨在细胞水平热疗联合化疗及免疫治疗的综合治疗方法是否获益更大及可能的联合作用机制,为临床综合治疗提供基础实验依据。方法1、应用MTT快速比色法检测不同的温度与不同浓度的DDP、TXT和沙培林单独及两两联合在24h和48h时间点对A549细胞生长抑制作用情况;并根据Veleriote法[1]判断高温联合药物的作用效果;通过两药相互作用指数(CDI)[2]判断药物联合作用效果;2、流式细胞仪(FCM)检测0.005KE/ml沙培林单独作用,42°C与2μg/ml DDP、1μg/ml TXT单独、两两联合及三者共同作用, 48h时间点对细胞凋亡影响情况;3、光学显微镜及荧光显微镜观察正常细胞、42°C单独作用、0.005KE/ml沙培林单独作用、42°C联合2μg/ml DDP和1μg/ml TXT共同作用, 48h时间点的细胞形态学变化。结果1、从细胞对数生长期开始24h和48h两个时间点检测,高温和三种药物单用均对A549有生长抑制作用(P<0.05),药物有剂量依赖关系;高温有温度依赖关系;2、从细胞对数生长期开始24h和48h两个时间点检测,高温与化疗药联合组对细胞生长抑制作用强于单独高温组(P <0.05);DDP与高温联合为协同作用;TXT为次加作用。高温与沙培林联合较高温单独作用对细胞生长抑制作用无统计学差别(P>0.05);3、从细胞对数生长期开始24h和48h两个时间点检测,DDP和TXT联合作用对细胞生长抑制为协同作用;DDP和沙培林联合也为协同作用;但TXT和沙培林联合无协同作用;4、从细胞对数生长期开始48h时间点检测,42°C、DDP2μg/ml和TXT1μg/ml三者联合凋亡率明显高于其他处理组(P <0.05);42°C联合DDP或TXT组凋亡率明显高于42°C组(P <0.05);0.005KE/ml沙培林作用细胞凋亡率明显高于对照组(P <0.05);5、普通光镜和荧光显微镜下42°C、DDP2μg/ml和TXT1μg/ml三者联合凋亡细胞数较对照组和42°C组明显增多,细胞形态学变化明显;0.005KE/ml沙培林组凋亡细胞数较对照组明显增多,细胞形态学变化明显。结论沙培林对A549细胞有直接的体外抑制增殖和诱导凋亡作用,与DDP联合对细胞体外生长抑制有协同作用,但与高温或TXT联合无协同作用;DDP、TXT、高温三者体外联合作用较三者单独或两两联合对A549有更显著的生长抑制和诱导凋亡作用。