基于核酸介导分子识别信号转换放大的荧光与电化学生物传感研究

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核酸介导的生物传感分析以核酸分子作为识别或者信号转换与放大元件,已经广泛用于各种分析物的检测,包括核酸、蛋白质、小分子,甚至细胞等。这些核酸介导的生物传感分析通过核酸序列的设计及功能基团的修饰,基于碱基配对杂交,实现目标分子的识别或者对识别信号进行信号转换放大,通常具有选择性好,灵敏度高等优点,引起了研究者的极大兴趣。本文利用核酸介导的分子识别及信号转换放大技术,结合荧光和电化学检测方法,构建了三种生物传感体系,分别用于生物素,聚合酶和miRNA的测定。具体研究内容如下:1.利用末端小分子及其相应受体蛋白的之间特异性结合作用可用于保护核酸不被核酸外切酶降解这一原理,以2-氨基嘌呤分子为荧光报告基团,建立了一种均相荧光体系用于检测生物素。当目标分子浓度在1×10-7 mol/L~2×10-7 mol/L的范围内时,荧光强度信号与生物素浓度呈现良好的线性关系。并且该方法可用于人血清样品复杂样品体系中的生物素检测。本方法显示出了分析时间短、选择性好、方便快捷等优点。因此该方法在生物医学相关研究中具有一定的应用前景。2.以Klenow Fragment exo-聚合酶(KF)为测定对象模型,基于荧光指示剂ATMND分子对双链中核苷缺失位点的嵌入能力,提出了一种DNA聚合酶活性免标记荧光测定方法。构建的方法对KF的活性检测具有较好的灵敏度,在0.05 U/mL~5 U/mL范围内呈现良好的线性,最低检测限约为0.0349 U/mL。该检测方法操作简便,核酸底物设计简单且无需额外信号分子的标记,在DNA聚合酶相关的疾病诊断、药物筛选及生物医学研究表现出良好的应用前景。3.以亚甲基蓝为电活性分子,基于催化发夹自组装介导的目标循环及发夹自组装核酸纳米结构辅助的信号放大,发展了一种免标记电化学方法用于miRNA-21的高灵敏测定。我们构建的方法在5×10-13~2.5×10-8 mol/L的miRNA-21浓度范围内,峰值电流与miRNA-21浓度呈现良好的线性关系,检测下限为4.8284×10-13 mol/L,并且具有较好的选择性。此外,利用所建立的方法成功开展了肝癌细胞HepG2中miRNA-21的测定,并且比较了肝癌细胞和正常肝细胞中miRNA-21的表达差异。因此,发展的电化学检测方法有望用于相关疾病的诊断研究中。
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