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该研究建立了检测禽白血病病毒(ALV)的补体结合试验(COFAL),分别滴定了溶血素、补体、抗血清及标准阳性抗原,对已知禽白血病病毒(RAV-1和RAV-2)进行了检测,结果与预期一致.在ELISA方法的建立过程中,分别进行了不同来源酶标板的均匀度检测和结合率比较;包被抗体和酶标抗体最适浓度比的测定;封闭液的选择和最适封闭浓度的确定;最佳底物作用时间的确定;包被抗体与其它相关病毒的交叉反应、敏感性及重复性试验等.结果不同来源的酶标板均匀度和结合率有显著差异,其中以进口可拆酶标板的均匀度和结合率最好,进口不可拆酶标板次之,国产不可拆酶标板最差.牛血清白蛋白(BSA)的封闭效果好于脱脂乳,其中1％BSA的封闭效果最好.包被抗体的最适浓度为10 μg/ml,酶标抗体的最适稀释度为1:8000.底物作用时间以15-20min为宜.与REV、IBDV、MDV、NDV、IBV等禽病病毒均不发生交叉反应.试验的重复性好.用建立的ELISA方法检测RAV-1和RAV-2病毒液,滴度分别可达10<'-5>/0.2ml和10<'-4>/0.2ml.参照RAV-1和RAV-2原始毒株的序列设计了一对引物(跨度为1.65kb左右),建立了PCR方法.通过对提取的含毒细胞基因组DNA进行PCR扩增,分别得到与试验设计相符的RAV-1和RAV-2 DNA片段,未接毒的正常细胞对照扩增产物为阴性.PCR反应体系中最适Mg<'2+>浓度为1.5mM.经验证此PCR扩增反应的特异性较强,与REV、MDV及内源性ALV均无交叉反应,检测RAV-1和RAV-2所需的最低靶DNA量均为100pg/μl.将RAV-1 PCR产物纯化,与pGEM-T easy载体连接,将重组质粒转化到大肠杆菌DH5 α中,经含Amp的培养基培养,进行蓝、白斑筛选,分别提取白斑与蓝斑质粒DNA,成功地筛选出RAV-1阳性重组子.利用Not Ⅰ酶切法和质粒PCR扩增法鉴定阳性重组子,证实了重组的正确性.取阳性质粒DNA进行测序,结果表明,克隆到的RAV-1基因gp85区段所测序列与已发表的相应序列之间的同源性为98.5％,3′端LTR区段所测序列的同源性为93.8％.对建立的COFAL、ELISA和PCR三种方法进行检测禽白血病病毒的敏感性比较,结果表明,PCR方法的敏感性最高,ELISA的敏感性次之,而COFAL的敏感性稍差.采用建立的COFAL、ELISA、PCR三种方法对不同兽用生物制品厂生产的111批次禽用活疫苗进行了禽白血病病毒污染的检测,结果ELISA和PCR方法均检出24批阳性样品,COFAL检出22批阳性样品,2批可疑,ELISA与PCR方法检测阳性样品的符合率为100％,COFAL方法与ELISA和PCR的阳性符合率为91.7％.