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背景：系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus, SLE)是一种常见的自身免疫病,异基因间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)移植治疗难治性SLE是一项新技术。我们前期实验已观察到SLE骨髓MSCs在基因表达谱、细胞骨架、成骨分化及凋亡衰老方面存在异常。目的：基于前期对狼疮骨髓MSCs功能异常的大量研究以及异基因MSCs移植治疗SLE患者有效的临床观察,本研究旨在观察狼疮骨髓MSCs对B细胞增殖分化的调控是否存在异常,以及CCL2在MSCs调控B细胞中的关键作用,进一步探讨SLE骨髓MSCs异常调控B细胞的机制来深入阐明异基因MSCs调节B细胞的分子基础及治疗SLE的具体机制。方法：将30只雌性MRL/lpr狼疮小鼠随机分为正常小鼠骨髓MSCs移植治疗组、狼疮小鼠骨髓MSCs移植治疗组和对照组(每组n=10),18周龄时正常或狼疮小鼠骨髓MSCs移植治疗组经尾静脉分别移植正常或狼疮骨髓MSCs1×106/只,对照组经尾静脉注射PBS。29周龄时处死小鼠,考马思亮蓝法检测24h尿蛋白含量,ELISA法检测血清抗双链DNA (ds-DNA)抗体、抗核抗体(ANA)、白介素(IL)-4、IL-10、转化生长因子(TGF)-β1水平,免疫组化法检测肾组织中TGF-β1的表达,观察肾脏病理改变及免疫复合物的沉积,评价疗效。在体外,直接贴壁筛选法分别分离培养狼疮小鼠(MRL/lpr小鼠)、正常小鼠(C57BL/6小鼠)、SLE患者和健康对照者的骨髓MSCs,免疫磁珠法分选正常小鼠脾脏B淋巴细胞后与分离培养的四种不同的骨髓MSCs直接接触共培养或transwell共培养,流式细胞术检测B细胞增殖(检测Brdu阳性率)及分化(检测CD138阳性率)情况,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清中免疫球蛋白IgG和IgM水平。而后,利用多因子检测试剂盒对狼疮或正常小鼠骨髓MSCs分泌的细胞因子进行差异表达筛选。在不同骨髓MSCs与B细胞共培养体系中加入CCL2中和抗体或修饰过的重组CCL2,或通过转染不同载体修饰不同骨髓MSCs的CCL2表达后再与B细胞共培养,流式细胞术和ELISA法检测B细胞增殖及分化情况的改变。实时荧光定量PCR(Realtime PCR)、免疫印迹法(western blot)、ELISA和免疫荧光法检测MSCs的CCL2表达水平。结果：狼疮小鼠骨髓MSCs移植治疗MRL/lpr小鼠的疗效明显不及正常小鼠骨髓MSCs移植治疗,表现在：狼疮小鼠骨髓MSCs移植治疗组的24h蛋白尿、血清中ANA、抗ds-DNA、IL-4、IL-10以及肾组织中TGF-β1的水平显著高于正常小鼠骨髓MSCs移植治疗组,而血清中TGF-β1的水平又显著低于正常小鼠骨髓MSCs移植治疗组;同时其肾组织中肾小球细胞的异常增生及系膜区基质的过度分泌以及肾组织中IgG、IgM免疫复合物的沉积的程度也显著重于正常小鼠骨髓MSCs移植治疗组。在体外,正常骨髓MSCs可以明显抑制B细胞的增殖(B细胞Brdu阳性率显著降低)和分化(B细胞CD138阳性率显著降低,培养上清中IgG、IgM含量显著下降)；其对B细胞增殖分化的抑制效应主要通过可溶性细胞因子来介导；狼疮骨髓MSCs对B细胞增殖分化的抑制效应存在缺陷。狼疮和正常小鼠骨髓MSCs细胞培养上清中差异表达的细胞因子筛选发现CCL2的表达存在明显差异；在B细胞和正常骨髓MSCs共培养(1：1)体系中加入CCL2的中和抗体可(部分)阻断MSCs对B细胞增殖分化的抑制作用；在活化的B细胞中加入经MMP剪切的CCL2(mpCCL2)后,B细胞增殖分化的能力被显著抑制；狼疮MSCs中CCL2的mRNA及蛋白表达水平显著低于正常MSCs;狼疮小鼠骨髓MSCs过表达CCL2可显著增强其对B细胞增殖分化的抑制能力,而正常小鼠骨髓MSCs沉默CCL2会显著消弱其抑制B细胞增殖分化的能力。结论：狼疮骨髓MSCs移植治疗MRL/lpr小鼠的各方面疗效明显不及正常骨髓MSCs。正常骨髓MSCs可以抑制B细胞的增殖分化,这种抑制作用主要通过MSCs分泌的可溶性细胞因子来介导,狼疮骨髓MSCs对B细胞增殖分化的免疫抑制存在缺陷,可能与其CCL2的表达异常有关。异基因MSCs移植治疗SLE有效的机制,可能与其对B细胞活化的免疫抑制作用相关。