论文部分内容阅读
目的:本研究的目的是观察广藿香醇在体外抗H1N1感染的疗效,分别观测在流感病毒感染时其对三种免疫细胞:树突状细胞,巨噬细胞和单核细胞的RLH免疫信号通路的影响,从而揭示广藿香醇抗H1N1感染的免疫原理和机制。方法:首先,建立感染甲流病毒的细胞模型,即用H1N1(A/E/13)病毒株感染人支气管上皮细胞(16HBE)。通过MTT实验,测定广藿香醇的最佳作用浓度。将脐血在体外进行分离培养,得到不同的免疫细胞,包括DC、单核细胞、巨噬细胞,再使用免疫组化进行鉴定。之后进行免疫细胞和病毒感染细胞模型共同培养,同时使用最佳浓度的广藿香醇进行治疗,分离出免疫细胞,收集其上层清液,用RT-PCR和ELISA检测RLH(RIG-1样解旋酶)途径的相关免疫细胞因子的表达。结果:流感病毒鸡胚扩增后,通过血凝试验测的病毒血凝滴度是1:640,TCID50是5×10-4.56。通过分离培养获得三种成熟的免疫细胞,包括DC、树突细胞、单核细胞。用100TCID50感染16HBE两小时后可成功建立H1N1感染细胞模型。通过通过MTT实验,得出广藿香醇的最佳作用浓度是20μg/mL。在感染病毒一天后,通过RT-PCR检测,发现免疫细胞内RLH通路相关因子RIG-1, IPS-1和Irf-7的表达量均升高,加入广藿香醇能够下调相关因子的表达。ELISA结果显示,感染病毒后IFN-γ和IL-4均显著升高,但使用广藿香醇的治疗组IFN-γ和IL-4表达下调,低于感染组。结论:1.病毒感染24h后,免疫细胞内RLH通路相关因子的表达量升高,说明在病毒入侵时,会激活细胞的免疫系统,从而诱导出了RLH及其下游炎性因子和干扰素,具有免疫识别作用。2.在使用广藿香醇的治疗后,相关因子的表达下调,说明广藿香醇能增强病毒存在时免疫细胞的活性,具有抑制病毒增殖的作用,作用机制与RLH通路有关。尤其是能降低RLH通路RIG-1、IRF-7,IPS-1的表达量。3.数据分析看出,当病毒入侵时,不同的免疫细胞组RIG-1、IRF-7,IPS-1的表达量,具有统计学意义(P<0.01).提示这些因子在RLH信号识别机制中参与病毒的识别,以及下游干扰素的产生,起到关键的作用.