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肝纤维化是由较多因素所导致的慢性肝损伤的结果。这些因素包含持续性病毒感染、酒精毒性和非酒精性脂肪肝。肝纤维化的基本特征是过多细胞外基质的积累,导致一种对炎症损伤的创伤修复应答,最终发展成为肝硬化和肝癌。在肝纤维化的进程中,ECM可以从已激活的肝星状细胞中分泌出来。肝星状细胞的增殖和活化在肝纤维化过程中有着较为关键的作用。因此,阻碍肝星状细胞的增殖和激活可以作为一种减轻肝纤维化的重要方式。随着分子生物学的发展,通过药物抑制信号通路的激活成为肝纤维化治疗的热点并取得一些成果。现今许多研究报道Wnt/β-catenin信号通路和它的下游细胞周期蛋白D1与c-Myc可调控多种器官纤维化疾病的进程。现有文献证实,在肝纤维化的过程中,Wnt/β-catenin信号通路和它的下游细胞周期蛋白D1与c-Myc均被激活。近些年来,有较多文献表明,生长抑素类似物奥曲肽可减轻肝纤维化,但奥曲肽是否能够通过抑制Wnt/β-catenin信号通路和它的下游细胞周期蛋白D1与c-Myc来抑制肝纤维化鲜有报道,因此,这值得进一步深入探讨。此课题实验研究Wnt/β-catenin信号通路和它的下游细胞周期蛋白D1与c-Myc在肝纤维化发生过程中的水平变化,并进一步研究奥曲肽对肝纤维的影响以及其中的分子机制。实验研究内容如下:(1)奥曲肽对大鼠肝纤维化的影响首先,肝纤维化模型组是对大鼠进行皮下注射四氯化碳来构建的,皮下注射四氯化碳和奥曲肽建立大鼠肝纤维化治疗组,分别收集正常组、模型组和治疗组的血样本和肝组织样本,采集肝组织进行HE和Masson染色,证实成功建立肝纤维化模型。通过生物化学检测试剂盒检测血样本中TBIL、AST、ALB和ALT的表达含量,并采用Western blot、qRT-PCR和免疫组化检测α-平滑肌激动蛋白和I型胶原的表达情况。结果显示:奥曲肽缓解大鼠的肝纤维化。(2)奥曲肽对肝纤维化大鼠Wnt/β-catenin信号通路、c-Myc和细胞周期蛋白D1基因的影响大鼠肝纤维化组织中Wnt1和β-连环蛋白的表达水平可以通过Western blot、qRT-PCR和免疫组化方式来测定。c-Myc和细胞周期蛋白D1的表达情况可用Western blot测定。实验结果表明:在模型组的大鼠肝组织中Wnt1、β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期蛋白D1含量增加,而在奥曲肽治疗组中得到缓解。(3)奥曲肽对LX-2肝星状细胞增殖的影响在体外实验中,LX-2细胞被浓度梯度的奥曲肽(10-8,10-7,10-6mol/L)干预,通过MTT法检测细胞活力。结果表明:这三种不同浓度的奥曲肽对LX-2细胞无毒性作用。TGF-β1作用激活的LX-2细胞使用这三种不同浓度的奥曲肽干预后,再采用MTT法测量细胞的吸光度。结果表明:激活的LX-2细胞的增殖能力被奥曲肽呈现浓度梯度抑制。(4)奥曲肽对LX-2肝星状细胞活化的影响在LX-2细胞中,通过TGF-β1的刺激,使得人肝星状细胞LX-2处于活化状态,同时使用三个浓度梯度的奥曲肽(10-8,10-7,10-6mol/L)来干预LX-2细胞。通过Western blot和qRT-PCR分别测定α-平滑肌肌动蛋白和I型胶原的含量变化,结果表明:三种不同浓度的奥曲肽呈浓度梯度抑制LX-2细胞的活化。(5)奥曲肽对LX-2肝星状细胞中Wnt/β-catenin信号通路、c-Myc和细胞周期蛋白D1基因表达的影响对LX-2细胞进行三种浓度梯度的奥曲肽(10-8,10-7,10-6mol/L)处理,通过Western blot和qRT-PCR分别测定Wnt1和β-连环蛋白的含量变化,通过Western blot来检测c-Myc和细胞周期蛋白D1的含量变化。结果表明:在激活的LX-2肝星状细胞中Wnt/β-catenin信号通路被激活,c-Myc和细胞周期蛋白D1基因表达含量增加,在三种不同浓度奥曲肽处理组中呈浓度梯度缓解。以上实验结果可证实:奥曲肽通过抑制Wnt/β-catenin信号通路、细胞周期蛋白D1与c-Myc来缓解肝纤维化和肝星状细胞的增殖与活化。